發(fā)布時間：2025-05-04 18:15

　　高血壓是一種常見的慢性病,現(xiàn)已成為全球主要的健康問題。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin I-converting enzyme,EC 3.4.15.1,ACE）在高血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,是高血壓治療藥物篩選中的關(guān)鍵酶。本研究首先以豬肺為原料,制備ACE并對其進(jìn)行性質(zhì)分析。采用預(yù)處理、酸沉淀、硫酸銨鹽析結(jié)合HiTrap Q HP強(qiáng)陰離子交換層析柱的方法對ACE進(jìn)行分離純化。SDS-PAGE結(jié)果顯示,ACE分子量約為180 kDa,較市售ACE具有更高的純度及比活力。PAS染色結(jié)果表明豬肺ACE是一種糖蛋白,其糖含量為34.37%。研究發(fā)現(xiàn),Zn²⁺可強(qiáng)烈抑制ACE的酶活力,且對ACE的抑制作用呈現(xiàn)濃度依賴性。酶學(xué)性質(zhì)表明,ACE在30-50℃,pH 6.0-10.0的范圍內(nèi),維持較高的酶活力。圓二色譜結(jié)果顯示豬肺ACE的熱變性溫度為（Tm）為58.5±0.4℃。酶動力學(xué)研究表明,ACE的K_m、K_cat和K_cat/K_m值分別為3.1×10^-4 mo...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)對高血壓的調(diào)節(jié)作用

繼Skeggs等在1954年首次從馬血漿中發(fā)現(xiàn)ACE能將血管緊張素I轉(zhuǎn)化為血管緊張素II后,Ryan等[26]研究也發(fā)現(xiàn)血管緊張素I和緩激肽被肺內(nèi)皮細(xì)胞腔表面的酶代謝,證實(shí)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)參與體內(nèi)血壓的調(diào)節(jié)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),ACE在高血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中均發(fā)揮調(diào)控作用。在AC....

圖1-2技術(shù)路線圖

本研究首先利用生化分離技術(shù)從豬肺中制備ACE,并對其基本性質(zhì)、二級結(jié)構(gòu)及疏水特性進(jìn)行表征。在此基礎(chǔ)上,以鮑魚加工副產(chǎn)物裙邊為原料制備膠原蛋白,利用酶解技術(shù)分解膠原蛋白制備ACE抑制肽,并對該ACE抑制肽進(jìn)行分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定。根據(jù)ACE抑制肽的氨基酸序列,利用固相合成技術(shù)對小肽進(jìn)....

圖3-1純化ACE的SDS-PAGE分析

ACE是一種細(xì)胞膜蛋白,為了增加ACE的溶出率,本研究在對豬肺進(jìn)行預(yù)處理時選用聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)作為促滲劑。TritonX-100是一種非離子型表面活性劑(或稱去污劑),它能溶解脂質(zhì),增加細(xì)胞膜的通透性。對預(yù)處理產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE分析(圖3-1....

圖3-2豬肺ACE純化的SDS-PAGE分析

將透析完全后的粗蛋白(圖3-2,泳道3)經(jīng)0.22μm孔徑的水系濾膜過濾除菌后上樣于預(yù)先用緩沖液A平衡的HiTrapQHP強(qiáng)陰離子交換層析柱(5mL)。流洗結(jié)束后將緩沖液A更換為洗脫緩沖液(由緩沖液A和緩沖液B組成)進(jìn)行線性梯度洗。結(jié)合酶活力、蛋白濃度和電泳結(jié)果,選擇收集7....

本文編號：4042701