魚皮膠原多肽是魚皮膠原蛋白經(jīng)過水解工藝制備得到的具有一定生理活性的小分子物質(zhì),近年來作為一種新興的功能性食品原料在國內(nèi)外開始盛行。蛋白酶水解法是制備魚皮膠原肽的重要方法,然而在實(shí)際應(yīng)用時(shí),存在酶解條件高、酶回收困難、生產(chǎn)成本高等問題。同時(shí),魚皮膠原多肽是優(yōu)質(zhì)的抗氧化原料,但制備過程復(fù)雜繁瑣、耗時(shí),這限制了其在食品工業(yè)中的應(yīng)用。本論文通過納米磺化聚苯乙烯微球(SPSNs)固定化枯草芽孢桿菌蛋白酶(Subtilisin,SU),研究了固定化酶過程的影響因素;利用制備的固定化酶水解羅非魚魚皮膠原,獲得體外抗氧化性良好的膠原多肽;在解析產(chǎn)物多肽序列的基礎(chǔ)上,利用分子對接技術(shù)實(shí)現(xiàn)了高通量篩選并驗(yàn)證了代表性功能肽的體外抗氧化活性。本論文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)枯草桿菌蛋白酶催化活性與分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的研究。借助于等溫量熱滴定技術(shù)(ITC),可知枯草桿菌蛋白酶對魚皮膠原蛋白的催化水解活性優(yōu)于牛血紅蛋白和牛血清白蛋白。通過對枯草桿菌蛋白酶生物信息的詳細(xì)分析,結(jié)果表明枯草桿菌蛋白酶為堿性蛋白,等電點(diǎn)為8.66,在pH小于7的溶液中表現(xiàn)為帶正電,易于與帶有負(fù)電的物質(zhì)發(fā)生靜電吸附。此外,其活性位點(diǎn)為由天...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRCT
第一章 緒論
    1.1 魚皮膠原多肽的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 魚皮膠原的綜合利用
        1.1.2 魚皮膠原多肽的生物活性
        1.1.3 魚皮膠原多肽的制備
    1.2 固定化酶技術(shù)的研究概況
        1.2.1 固定化酶的方法
        1.2.2 固定化酶的載體
        1.2.3 固定化酶的應(yīng)用
    1.3 分子對接技術(shù)在抗氧化活性物質(zhì)研究中的應(yīng)用
        1.3.1 分子對接技術(shù)
        1.3.2 抗氧化機(jī)制
        1.3.3 基于分子對接技術(shù)篩選抗氧化活性成分的研究進(jìn)展
    1.4 研究意義及研究內(nèi)容
        1.4.1 研究意義
        1.4.2 研究內(nèi)容及技術(shù)路線
第二章 枯草桿菌蛋白酶的催化活性及分子結(jié)構(gòu)
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 枯草桿菌蛋白酶與底物相互作用的研究
        2.3.2 枯草桿菌蛋白酶分子結(jié)構(gòu)分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 ITC法測定枯草桿菌蛋白酶與底物的結(jié)合特性
        2.4.2 ITC法測定枯草桿菌蛋白酶動(dòng)力學(xué)特性
        2.4.3 枯草桿菌蛋白酶分子的一級結(jié)構(gòu)分析
        2.4.4 枯草桿菌蛋白酶分子的二級結(jié)構(gòu)分析
        2.4.5 枯草桿菌蛋白酶序列的特征領(lǐng)域分析
        2.4.6 枯草桿菌蛋白酶的三級結(jié)構(gòu)分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 SPSNs固定化枯草桿菌蛋白酶的制備及酶學(xué)特性研究
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 SPSNs的制備
        3.3.2 SPSNs磺化度的測定
        3.3.3 SPSU固定化酶的制備
        3.3.4 SPSNs與固定化酶微球的表征
        3.3.5 游離酶與固定化酶的酶學(xué)特性研究
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 SPSNs磺化度
        3.4.2 SPSU固定化酶的制備
        3.4.3 SPSNs與固定化酶微球的表征
        3.4.4 游離酶與固定化酶的最適pH值
        3.4.5 游離酶與固定化酶的最適溫度
        3.4.6 固定化酶的重復(fù)使用性
    3.5 本章小結(jié)
第四章 固定化酶制備魚皮膠原多肽及基于分子對接技術(shù)篩選抗氧化活性肽的研究
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 魚皮膠原水解液的制備
        4.3.2 多肽含量測定
        4.3.3 抗氧化活性測定
        4.3.4 魚皮膠原多肽序列質(zhì)譜分析
        4.3.5 基于分子對接篩選抗氧化活性肽的研究
        4.3.6 抗氧化活性肽分子對接結(jié)果活性驗(yàn)證
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 魚皮膠原水解液多肽含量測定
        4.4.2 魚皮膠原水解液中多肽的抗氧化活性測定
        4.4.3 魚皮膠原水解液多肽序列分析
        4.4.4 魚皮膠原水解液多肽分子對接
        4.4.5 抗氧化活性肽分子對接結(jié)果活性驗(yàn)證
        4.4.6 抗氧化活性肽分子對接的可視化分析
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論和展望
    一、結(jié)論
    二、研究創(chuàng)新點(diǎn)
    三、展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
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本文編號：3745534