發(fā)布時(shí)間：2022-12-23 04:03

　　近年來(lái),對(duì)水產(chǎn)品及其制品中的致敏原過(guò)敏的人群日益增多。由于缺乏有效的治療手段,避免攝入相關(guān)食物致敏原仍是預(yù)防食物過(guò)敏的主要途徑。這就需要對(duì)食品中潛在的致敏原進(jìn)行快速高效的檢測(cè)及標(biāo)識(shí)。精氨酸激酶（Arginine kinase,AK）是甲殼類食品的主要致敏原之一。目前,精氨酸激酶的檢測(cè)方法主要為PCR法和質(zhì)譜分析法。然而這兩種方法操作復(fù)雜,成本較高,且易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。因此基于上述問(wèn)題,本研究旨在構(gòu)建出一種操作簡(jiǎn)單,準(zhǔn)確靈敏,低廉環(huán)保的甲殼類精氨酸激酶檢測(cè)方法。研究的主要內(nèi)容如下:1、本文通過(guò)硫酸銨沉淀法及陰離子交換柱純化得到精氨酸激酶;液相質(zhì)譜聯(lián)用法鑒定該蛋白為凡納濱對(duì)蝦中的精氨酸激酶;MALDI-TOF測(cè)定其分子量為39675 Da。對(duì)提取的精氨酸激酶的氨基酸組成進(jìn)行分析,顯示含量最高的氨基酸分別為天冬氨酸、谷氨酸和賴氨酸。通過(guò)紫外可見光光譜結(jié)果顯示精氨酸激酶在210 nm和280 nm具有兩個(gè)特征吸收峰。通過(guò)圓二色光譜結(jié)果顯示,精氨酸激酶的二級(jí)結(jié)構(gòu)中α螺旋占64%,β片層占11%,其余占25%。通過(guò)ELISA分析法證明提取的精氨酸激酶具有致敏性。通過(guò)多方面實(shí)驗(yàn)確定精氨酸激酶的結(jié)構(gòu)及... 

【文章頁(yè)數(shù)】：102 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
中英文對(duì)照表
第1章 引言
    1.1 甲殼類水產(chǎn)品過(guò)敏及檢測(cè)概況
        1.1.1 甲殼類致敏原的過(guò)敏反應(yīng)機(jī)制
        1.1.2 甲殼類主要致敏原
        1.1.3 甲殼類致敏原檢測(cè)方法研究進(jìn)展
    1.2 核酸適配體在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展
        1.2.1 核酸適配體概述
        1.2.2 核酸適配體在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展
    1.3 聚多巴胺在生物傳感中的應(yīng)用進(jìn)展
        1.3.1 聚多巴胺概述
        1.3.2 聚多巴胺在生物傳感中的應(yīng)用進(jìn)展
    1.4 主要研究?jī)?nèi)容與意義
        1.4.1 研究意義及目的
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
第2章 精氨酸激酶純化、鑒定及結(jié)構(gòu)分析
    2.1 前言
    2.2 儀器與試劑
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 材料與試劑
        2.2.3 溶液的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 精氨酸激酶的粗提
        2.3.2 精氨酸激酶的純化
        2.3.3 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)電泳分析
        2.3.4 精氨酸激酶質(zhì)譜鑒定
        2.3.5 精氨酸激酶紫外光譜分析
        2.3.6 精氨酸激酶結(jié)構(gòu)分析
        2.3.7 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 精氨酸激酶的提純
        2.4.2 SDS-PAGE分析精氨酸激酶純度
        2.4.3 精氨酸激酶質(zhì)譜分析
        2.4.4 紫外可見光光譜分析
        2.4.5 精氨酸激酶結(jié)構(gòu)分析
        2.4.6 精氨酸激酶免疫原性分析
    2.5 小結(jié)
第3章 磁珠-SELEX篩選精氨酸激酶核酸適配體
    3.1 前言
    3.2 儀器與試劑
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.2 材料與試劑
        3.2.3 溶液的配制
        3.2.4 隨機(jī)核苷酸文庫(kù)和引物的構(gòu)建
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 AK與氨基磁珠的偶聯(lián)
        3.3.2 SELEX體外篩選
        3.3.3 PCR擴(kuò)增體系和反應(yīng)條件優(yōu)化
        3.3.4 適配體的克隆、測(cè)序
        3.3.5 核酸適配體的親和性試驗(yàn)
        3.3.6 核酸適配體的特異性試驗(yàn)
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 AK偶聯(lián)磁珠的表征
        3.4.2 磁珠-SELEX篩選條件優(yōu)化
        3.4.3 篩選輪數(shù)的確定
        3.4.4 測(cè)序結(jié)果分析及二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.4.5 核酸適配體親和力測(cè)定
        3.4.6 核酸適配體特異性分析
    3.5 小結(jié)
第4章 聚多巴胺-熒光適配體傳感器在甲殼類精氨酸激酶檢測(cè)中的應(yīng)用
    4.1 前言
    4.2 儀器與試劑
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.2 材料與試劑
        4.2.3 溶液配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 聚多巴胺的合成及表征
        4.3.2 聚多巴胺探針的合成
        4.3.3 方法學(xué)考察
        4.3.4 樣品預(yù)處理
        4.3.5 實(shí)際樣品的檢測(cè)
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 聚多巴胺的合成及理化性質(zhì)表征
        4.4.2 聚多巴胺探針的構(gòu)建與優(yōu)化
        4.4.3 生物傳感器的構(gòu)建表征及方法學(xué)考察
        4.4.5 實(shí)際樣品的蛋白分析及精氨酸激酶的檢測(cè)
    4.5 小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3724676