中國(guó)是水產(chǎn)品生產(chǎn)與消費(fèi)的大國(guó),研究數(shù)據(jù)顯示,2001年至今,我國(guó)的水產(chǎn)品生產(chǎn)與消費(fèi)均在逐年遞增,生產(chǎn)與消費(fèi)量常年位于世界第一。副溶血性弧菌是水產(chǎn)品中最為常見的食源性致病菌,嚴(yán)重威脅著水產(chǎn)品質(zhì)量與安全,制約著水產(chǎn)行業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是控制水產(chǎn)品中副溶血性弧菌危害的重要手段和工具,可有效控制副溶血性弧菌的潛在風(fēng)險(xiǎn)。本文針對(duì)副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中危害識(shí)別、暴露評(píng)估、危害特征描述這3大核心部分的缺陷與不足展開攻關(guān),進(jìn)行了基于活菌DNA的副溶血性弧菌危害識(shí)別新技術(shù)研究、基于概率分布構(gòu)建副溶血性弧菌暴露評(píng)估中描述細(xì)菌生長(zhǎng)速率和濃度的隨機(jī)模型研究、以及副溶血性弧菌關(guān)鍵危害特征的毒力蛋白VopA晶體學(xué)的初步研究。主要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下:1.基于活菌DNA的副溶血性弧菌危害識(shí)別新技術(shù)研究傳統(tǒng)副溶血性弧菌危害識(shí)別技術(shù)較少關(guān)注水產(chǎn)品中死活菌的問題,常把死活菌的數(shù)量共同計(jì)算入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中,導(dǎo)致其患病風(fēng)險(xiǎn)的錯(cuò)誤估計(jì),造成了副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的不確定性。為了更準(zhǔn)確地識(shí)別副溶血性弧菌的實(shí)際危害,亟需發(fā)展一套基于活菌DNA的副溶血性弧菌危害識(shí)別新技術(shù),用以正確評(píng)估副溶血性弧菌的真實(shí)風(fēng)險(xiǎn)。疊氮溴化丙... 

【文章頁(yè)數(shù)】：131 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述 水產(chǎn)品中副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究現(xiàn)狀及展望
    1.1 中國(guó)水產(chǎn)品生產(chǎn)與消費(fèi)現(xiàn)狀
    1.2 水產(chǎn)品中常見食源性致病菌
    1.3 副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究現(xiàn)狀
        1.3.1 國(guó)外副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究現(xiàn)狀
        1.3.2 國(guó)內(nèi)副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究現(xiàn)狀
    1.4 副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估三大核心步驟的研究現(xiàn)狀與展望
    1.5 副溶血性弧菌危害識(shí)別技術(shù)的研究現(xiàn)狀與展望
        1.5.1 平板計(jì)數(shù)法
        1.5.2 最大或然數(shù)方法
        1.5.3 免疫試紙條
        1.5.4 基于RNA的檢測(cè)方法
        1.5.5 qPCR活菌定量方法
        1.5.6 副溶血性弧菌危害識(shí)別技術(shù)研究的展望
    1.6 副溶血性弧菌暴露評(píng)估模型的研究現(xiàn)狀與展望
        1.6.1 預(yù)測(cè)微生物學(xué)研究進(jìn)展
        1.6.2 副溶血性弧菌預(yù)測(cè)微生物學(xué)研究進(jìn)展與展望
        1.6.3 應(yīng)用概率分布描述副溶血性弧菌濃度的研究現(xiàn)狀與展望
    1.7 副溶血性弧菌危害特征描述的研究現(xiàn)狀與展望
        1.7.1 副溶血性弧菌致病性相關(guān)毒力蛋白結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究現(xiàn)狀
            1.7.1.1 耐熱直接溶血素蛋白(TDH)
            1.7.1.2 幼蝦急性肝胰腺壞死病致病蛋白pirA/B
            1.7.1.3 三型分泌系統(tǒng)結(jié)構(gòu)蛋白VtrA/VtrB/VtrC
            1.7.1.4 三型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白VopL
        1.7.2 副溶血性弧菌致病性相關(guān)毒力蛋白結(jié)構(gòu)生物學(xué)展望
            1.7.2.1 耐熱相關(guān)溶血素蛋白(TRH)
            1.7.2.2 三型分泌系統(tǒng)(T3SS)及其效應(yīng)物蛋白(T3SE)
            1.7.2.3 外膜生物合成轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)
    1.8 本課題的研究方案
    參考文獻(xiàn)
第二章 基于活菌DNA的副溶血性弧菌危害識(shí)別新技術(shù)研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 副溶血性弧菌和霍亂弧菌菌株
        2.2.3 活菌DNA快速篩選儀器的設(shè)計(jì)圖
        2.2.4 基于活菌DNA篩選儀器的PMA前處理過(guò)程
        2.2.5 引物、探針及PCR反應(yīng)條件
        2.2.6 PMA兩重qPCR技術(shù)的特異性分析
        2.2.7 PMA兩重qPCR技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建
        2.2.8 致病性弧菌死菌的制備
        2.2.9 PMA兩重qPCR在人工接種樣品中的應(yīng)用
        2.2.10 PMA兩重qPCR在實(shí)際水產(chǎn)樣品中的應(yīng)用
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 活菌DNA快速篩選儀器的構(gòu)建
        2.3.2 PMA兩重qPCR的特異性分析
        2.3.3 PMA兩重qPCR的擴(kuò)增效率
        2.3.4 PMA兩重qPCR最低定量限
        2.3.5 PMA兩重qPCR在人工接種樣本中區(qū)分死活菌的研究
        2.3.6 PMA兩重qPCR在實(shí)際水產(chǎn)樣本中的應(yīng)用
    2.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 基于概率分布構(gòu)建副溶血性弧菌暴露評(píng)估中描述細(xì)菌生長(zhǎng)速率和濃度的隨機(jī)模型研究
    第一節(jié) 南美白對(duì)蝦中副溶血性弧菌隨機(jī)預(yù)測(cè)生長(zhǎng)模型的研究
        3.1.1 引言
        3.1.2 材料與方法
            3.1.2.1 副溶血性弧菌菌株生長(zhǎng)信息的收集
            3.1.2.2 南美白對(duì)蝦中副溶血性弧菌生長(zhǎng)數(shù)據(jù)的整合及二級(jí)模型的構(gòu)建及驗(yàn)證
            3.1.2.3 南美白對(duì)蝦中副溶血性弧菌隨機(jī)預(yù)測(cè)生長(zhǎng)模型的構(gòu)建
        3.1.3 結(jié)果與分析
            3.1.3.1 副溶血性弧菌生長(zhǎng)特性信息庫(kù)構(gòu)建
            3.1.3.2 副溶血性弧菌最大比生長(zhǎng)速率二級(jí)模型的構(gòu)建與驗(yàn)證
            3.1.3.3 副溶血性弧菌最大比生長(zhǎng)速率的隨機(jī)預(yù)測(cè)模型
        3.1.4 討論
        3.1.5 小結(jié)
    第二節(jié) 水產(chǎn)品中副溶血性弧菌污染量描述的概率評(píng)估模型研究
        3.2.1 引言
        3.2.2 材料與方法
            3.2.2.1 樣品采集
            3.2.2.2 MPN-PCR法
            3.2.2.3 統(tǒng)計(jì)分析
            3.2.2.4 使用概率分布描述細(xì)菌污染
        3.2.3 結(jié)果和討論
            3.2.3.1 上海市大型超市水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的污染情況分析
            3.2.3.2 最適概率分布的選擇
        3.2.4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 副溶血性弧菌危害特征關(guān)鍵毒力蛋白VopA表達(dá)純化與結(jié)晶條件的篩選
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 VopA蛋白的生物信息學(xué)分析
        4.2.3 6His-MBP-TEV-VopA重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.4 6His-TEV-VopA重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.5 VopA重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.6 VopA重組蛋白的提取
        4.2.7 VopA重組蛋白的純化
        4.2.8 Tev酶切及VopA重組蛋白的二次純化
        4.2.9 VopA蛋白結(jié)晶條件的篩選
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 VopA蛋白的生物信息學(xué)分析結(jié)果
            4.3.1.1 VopA蛋白理化性質(zhì)分析
            4.3.1.2 VopA蛋白信號(hào)肽與跨膜區(qū)域預(yù)測(cè)與分析
            4.3.1.3 VopA蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與分析
            4.3.1.4 VopA蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與分析
        4.3.2 VopA表達(dá)載體構(gòu)建結(jié)果
        4.3.3 6His-MBP-Tev-VopA重組蛋白的表達(dá)與純化
        4.3.4 6His-Tev-VopA重組蛋白的表達(dá)與純化
        4.3.5 6His-Tev-VopA重組蛋白的大規(guī)模制備
        4.3.6 VopA蛋白結(jié)晶條件的篩選
    4.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
本研究不足與展望
附錄
在上海海洋大學(xué)就讀博士期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3716715