發(fā)布時間：2022-10-08 18:01

　　異常的WNT信號傳導(dǎo)與胃潰瘍和黑色素瘤等多種疾病密切相關(guān),因此尋找WNT通路調(diào)節(jié)劑則成為治療WNT信號相關(guān)疾病的重要手段。植物多酚具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗腫瘤和增強(qiáng)免疫力等多種生理活性,多酚類物質(zhì)已經(jīng)成為開發(fā)WNT信號調(diào)節(jié)小分子化合物的研究熱點(diǎn)。本論文從26種植物中篩選出具有良好WNT信號抑制活性的枳實(shí)和桂枝兩種原料。其中,枳實(shí)是國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)使用的保健食品原料,桂枝則為日常飲食中常用的香料,枳實(shí)和桂枝中都含有豐富的多酚類物質(zhì),可作為保健食品原料進(jìn)行研究。利用體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇從高良姜、茯苓、白扁豆、黃芪、吳茱萸、豆蔻、桂枝、郁金、白芷、枳實(shí)、白術(shù)、佛手、姜半夏、石斛、廣藿香、甘草、人參、當(dāng)歸、麥冬、木香、柴胡、砂仁、陳皮、黨參、白芍、干姜26種植物原料中提取出多酚粗提物,并通過Folin–Ciocalteu測定其多酚含量。HEK293-TOPflash雙熒光素酶報告基因細(xì)胞模型可表征WNT信號處于激活或抑制狀態(tài)。首先通過MTT法,測定不同植物多酚提取物對于HEK293-TOPflash細(xì)胞的最大無毒性作用濃度。HEK293-TOPflash細(xì)胞中添加WNT3A條件培... 

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 WNT信號研究進(jìn)展
        1.1.1 WNT信號簡介
        1.1.2 WNT信號研究主要方法
    1.2 WNT信號通路與人類健康的理論研究
        1.2.1 WNT信號通路與胃黏膜損傷、胃癌
        1.2.2 WNT信號通路與結(jié)直腸癌
        1.2.3 WNT信號通路與黑色素瘤
        1.2.4 WNT信號通路與乳腺癌
        1.2.5 WNT信號通路與骨質(zhì)疏松
        1.2.6 WNT信號通路與自身免疫病
    1.3 WNT信號通路藥物的研究進(jìn)展
    1.4 植物多酚調(diào)節(jié)WNT的研究進(jìn)展
        1.4.1 植物多酚靶向WNT信號的上游蛋白
        1.4.2 植物多酚靶向WNT信號中β-catenin降解復(fù)合體
        1.4.3 植物多酚靶向WNT信號中β-catenin/TCF
    1.5 本論文的主要研究內(nèi)容及立題依據(jù)
第二章 篩選具有WNT信號抑制活性的植物多酚
    引言
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    2.2 主要儀器與設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 植物多酚的制備
        2.3.2 多酚含量的測定
        2.3.3 植物多酚對HEK293-TOPflash細(xì)胞活力的影響
            2.3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.3.2 細(xì)胞活力測定
        2.3.4 篩選抑制WNT信號的植物多酚提取物
            2.3.4.1 WNT3A條件培養(yǎng)基的制備
            2.3.4.2 HEK293-TOPflash細(xì)胞WNT信號值測定
        2.3.5 統(tǒng)計分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 不同植物多酚提取物中多酚含量
        2.4.2 植物多酚提取物對HEK293-TOPflash細(xì)胞存活率的影響
        2.4.3 植物多酚提取物對WNT3A條件培養(yǎng)基激活WNT信號的影響
    2.5 本章小結(jié)
第三章 植物多酚提取物對WNT信號通路依賴的胃潰瘍大鼠保護(hù)作用活性評價
    引言
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    3.2 主要儀器與設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 急性胃潰瘍大鼠模型的建立
        3.3.2 宏觀胃黏膜病變評估
        3.3.3 胃潰瘍大鼠胃組織HE染色
        3.3.4 統(tǒng)計分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 無水乙醇誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍損傷模型
        3.4.2 枳實(shí)、桂枝多酚提取物對大鼠胃潰瘍指數(shù)的影響
        3.4.3 枳實(shí)、桂枝多酚提取物對大鼠胃潰瘍組織的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 植物多酚提取物對WNT信號通路依賴的黑色素瘤小鼠的防治作用
    引言
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    4.2 主要儀器與設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 黑色素腫瘤小鼠模型的建立及分組
        4.3.2 枳實(shí)、桂枝多酚提取物干預(yù)黑色素瘤小鼠
        4.3.3 黑色素瘤小鼠腫瘤體積及體重比測定
        4.3.4 黑色素瘤小鼠組織HE染色
        4.3.5 統(tǒng)計分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 枳實(shí)、桂枝多酚提取物對小鼠黑色素瘤的影響
        4.4.2 枳實(shí)、桂枝多酚提取物對黑色素瘤小鼠肝腎組織的影響
    4.5 本章小結(jié)
第五章 枳實(shí)多酚分離純化結(jié)構(gòu)鑒定
    引言
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    5.2 主要儀器與設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 大孔樹脂的篩選
        5.3.2 大孔樹脂靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)
        5.3.3 RKO細(xì)胞存活率的測定
        5.3.4 純化多酚組分WNT信號抑制活性測定
        5.3.5 多酚提取單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
            5.3.5.1 乙醇濃度單因素實(shí)驗(yàn)
            5.3.5.2 料液比單因素實(shí)驗(yàn)
            5.3.5.3 提取時間單因素實(shí)驗(yàn)
            5.3.5.4 吸附等溫線測定實(shí)驗(yàn)
        5.3.6 大孔樹脂動態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)
        5.3.7 Ed U法檢測WNT依賴腸癌細(xì)胞增殖率
        5.3.8 超高效液相色譜-質(zhì)譜分析純化組分多酚組成
        5.3.9 統(tǒng)計分析
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 大孔樹脂的篩選
        5.4.2 大孔樹脂靜態(tài)吸附解吸動力學(xué)曲線
        5.4.3 吸附等溫線
        5.4.4 枳實(shí)和桂枝多酚對RKO細(xì)胞活力及WNT信號的影響
        5.4.5 大孔樹脂動態(tài)吸附解吸
        5.4.6 多酚純化組分對HCT116細(xì)胞增殖率的影響
        5.4.7 純化枳實(shí)多酚組分的組成分析
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、本論文的創(chuàng)新
    三、展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3688172