鴨蛋蛋清蛋白屬于全價(jià)蛋白質(zhì),含有人體必需氨基酸、鈣、維生素以及微量礦物質(zhì)元素。但我國(guó)工業(yè)生產(chǎn)中,鴨蛋蛋清的利用較少,造成了資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。卵清蛋白是蛋清中最主要的蛋白質(zhì),含量為56%,研究其應(yīng)用價(jià)值有助于鴨蛋蛋清的高值化利用。而生物活性肽在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域展現(xiàn)了巨大的應(yīng)用潛力,從酶解物中分離制備活性肽,成為各種植物和動(dòng)物蛋白質(zhì)高值化利用的重要途徑之一。因此本文以鴨蛋蛋清為原料,提取其中的卵清蛋白,蛋白酶酶解后再進(jìn)行分離純化、多肽序列鑒定,并使用體外抗氧化模型和RAW 264.7細(xì)胞模型評(píng)估其抗氧化活性和免疫調(diào)節(jié)活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:本研究比較了p H 4.5、60%飽和硫酸銨沉淀法、p H 9.0、60%飽和硫酸銨沉淀法、PEG 4000分離法三種提取卵清蛋白的工藝,發(fā)現(xiàn)采用p H 4.50、60%飽和硫酸銨沉淀法獲得的蛋白總氮含量為86.75%、蛋白得率為85.32%。圓二色譜法預(yù)測(cè)其二級(jí)結(jié)構(gòu)為:α-螺旋15.06%、β-折疊24.69%、β-轉(zhuǎn)角25.63%、無(wú)規(guī)則卷曲33.83%。此外,1000μg/m L樣品刺激下,RAW 264.7細(xì)胞上清液中NO、TNF-α、IL-6的分泌... 

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 鴨蛋蛋清的組成及其特點(diǎn)
    1.2 卵清蛋白的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 卵清蛋白簡(jiǎn)介
        1.2.2 卵清蛋白的應(yīng)用價(jià)值
            1.2.2.1 營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)用價(jià)值
            1.2.2.2 理化性質(zhì)及其應(yīng)用
        1.2.3 卵清蛋白的提取方法
        1.2.4 卵清蛋白肽的生物活性
            1.2.4.1 抗菌活性
            1.2.4.2 抗氧化活性
            1.2.4.3 免疫活性肽
            1.2.4.4 其他活性
        1.2.5 鴨蛋卵清蛋白的研究現(xiàn)狀
    1.3 本課題研究的立題依據(jù)和主要研究?jī)?nèi)容
        1.3.1 立題依據(jù)
        1.3.2 主要研究?jī)?nèi)容
第二章 鴨蛋卵清蛋白的提取及其二級(jí)結(jié)構(gòu)和功能活性的研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 試劑
        2.2.3 主要儀器與設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 鴨蛋中卵清蛋白的提取
        2.3.2 鴨蛋卵清蛋白中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定及得率的計(jì)算
        2.3.3 提取的鴨蛋卵清蛋白分子量測(cè)定
        2.3.4 鴨蛋卵清蛋白的氨基酸組成
        2.3.5 鴨蛋卵清蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
            2.3.5.1 紅外光譜分析
            2.3.5.2 圓二色譜分析
            2.3.5.3 掃描電鏡分析
        2.3.6 鴨蛋卵清蛋白的免疫調(diào)節(jié)活性評(píng)價(jià)
        2.3.7 鴨蛋卵清蛋白的抗氧化活性評(píng)價(jià)
            2.3.7.1 DPPH自由基清除能力
            2.3.7.2 ABTS~+·自由基清除能力
            2.3.7.3 ORAC法測(cè)定樣品抗氧化能力
        2.3.8 數(shù)據(jù)處理
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 鴨蛋卵清蛋白的蛋白含量分析
        2.4.2 鴨蛋卵清蛋白分子量和純度測(cè)定
        2.4.3 鴨蛋卵清蛋白的氨基酸組成比較
        2.4.4 鴨蛋卵清蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
            2.4.4.1 鴨蛋卵清蛋白的傅里葉紅外光譜分析
            2.4.4.2 鴨蛋卵清蛋白的圓二色譜分析
            2.4.4.3 鴨蛋卵清蛋白的掃描電鏡分析
        2.4.5 鴨蛋卵清蛋白的免疫調(diào)節(jié)活性分析
        2.4.6 蛋白的抗氧化活性評(píng)價(jià)
    2.5 本章小結(jié)
第三章 鴨蛋卵清蛋白的酶解及其產(chǎn)物抗氧化活性、免疫調(diào)節(jié)活性的研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 試劑
        3.2.3 儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 蛋白酶酶活的測(cè)定
        3.3.2 水解度的測(cè)定
        3.3.3 水解酶的篩選
        3.3.4 單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            3.3.4.1 最佳酶解時(shí)間的篩選
            3.3.4.2 加酶量的篩選
            3.3.4.3 酶解溫度的篩選
            3.3.4.4 酶解pH的篩選
        3.3.5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.3.6 HD分子量的測(cè)定
        3.3.7 HD的免疫調(diào)節(jié)活性評(píng)價(jià)
        3.3.8 HD對(duì) AAPH誘導(dǎo)的紅細(xì)胞溶血的保護(hù)作用
        3.3.9 HD的體外抗氧化活性評(píng)價(jià)
            3.3.9.1 DPPH自由基清除能力
            3.3.9.2 ABTS~+·自由基清除能力
            3.3.9.3 ORAC法測(cè)定樣品體外抗氧化能力
        3.3.10 數(shù)據(jù)處理
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 不同蛋白酶的酶活測(cè)定
        3.4.2 五種水解酶的篩選
        3.4.3 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.4.3.1 酶解時(shí)間的篩選
            3.4.3.2 加酶量的篩選
            3.4.3.3 酶解溫度的篩選
            3.4.3.4 酶解pH的篩選
        3.4.4 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.4.5 HD的分子量分布
        3.4.6 HD的免疫調(diào)節(jié)活性評(píng)價(jià)
        3.4.7 HD對(duì) AAPH誘導(dǎo)的紅細(xì)胞溶血的保護(hù)作用
        3.4.8 HD的體外抗氧化活性評(píng)價(jià)
    3.5 本章小結(jié)
第四章 鴨蛋卵清蛋白酶解物中抗氧化和免疫調(diào)節(jié)活性肽的分離與鑒定
    4.1 前言
    4.2 材料與設(shè)備
        4.2.1 材料
        4.2.2 主要試劑
        4.2.3 主要儀器與設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 鴨蛋卵清蛋白多肽的分離純化
            4.3.1.1 DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換柱純化多肽
            4.3.1.2 Sephadex G-15分離純化
        4.3.2 HPLC-MS/MS分析
        4.3.3 反向合成多肽
        4.3.4 免疫調(diào)節(jié)活性評(píng)價(jià)
            4.3.4.1 細(xì)胞存活率
            4.3.4.2 NO和細(xì)胞因子的測(cè)定
        4.3.5 抗氧化活性評(píng)價(jià)
            4.3.5.1 DPPH自由基清除能力
            4.3.5.2 ABTS~+·自由基清除能力
            4.3.5.3 ORAC法測(cè)定樣品抗氧化能力
            4.3.5.4 紅細(xì)胞溶血
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 DEAE Sepharose F F陰離子交換柱分離純化
        4.4.2 DEAE Sepharose F F陰離子柱洗脫組分的免疫調(diào)節(jié)活性研究
            4.4.2.1 細(xì)胞存活率
            4.4.2.2 DEAE Sepharose F F陰離子柱組分免疫調(diào)節(jié)活性
            4.4.2.3 DEAE Sepharose F F陰離子柱洗脫組分的抗氧化活性比較
            4.4.2.4 DEAE Sepharose F F陰離子柱洗脫組分對(duì)紅細(xì)胞溶血抑制作用
        4.4.3 Sephadex G-15 凝膠柱分離純化
        4.4.4 Sephadex G-15 洗脫組分的活性探究
            4.4.4.1 HD-1的免疫調(diào)節(jié)活性
            4.4.4.2 HD-1的抗氧化活性研究
            4.4.4.3 HD-1的紅細(xì)胞溶血抑制作用
        4.4.5 Sephadex G-15 洗脫組分的LC-MS/MS分析
        4.4.6 合成多肽的活性研究
            4.4.6.1 合成多肽的免疫調(diào)節(jié)活性研究
            4.4.6.2 合成多肽的抗氧化活性研究
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3655216