有機磷農(nóng)藥被廣泛用于全球范圍的蟲害防治,但由于有機磷農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制,可能導致生物體的神經(jīng)中樞疾病甚至死亡。全球多個國家和組織均頒布了相關的法律法規(guī),對食品、飲用水和環(huán)境中的有機磷農(nóng)藥殘留量進行嚴格監(jiān)管。因此,對有機磷農(nóng)藥進行精準定量尤為重要。由于光學傳感器具有靈敏度高、操作簡便等特點,開發(fā)新型的有機磷農(nóng)藥光學傳感器有利于促進食品安全狀況改善和推動食品分析技術發(fā)展。主要研究內容如下:（1）構建了基于6-羧基熒光素（FAM）和金納米粒子（AuNPs）的熒光適配體傳感器,并應用于蔬菜樣品中甲拌磷農(nóng)藥的測定:以FAM標記的甲拌磷適配體（FAM-適配體）作為熒光供體,以檸檬酸鈉還原法制備的AuNPs作為熒光受體,構建了基于熒光共振能量轉移（FRET）原理的適配體傳感器。沒有甲拌磷存在時,AuNPs對單鏈核酸適配體具有吸附作用,通過FRET猝滅FAM-適配體的熒光;而當甲拌磷存在時,適配體因與甲拌磷具有更強的親和力而離開AuNPs表面,FRET受到抑制。通過對反應時間和AuNPs濃度的優(yōu)化,檢測體系的熒光強度與甲拌磷濃度在0.5⁵ mg/L的范圍內呈良好的線性,線性... 

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

有機磷農(nóng)藥抑制膽堿酯酶活性的原理

體技術體技術概述去的 30 年中，適配體和指數(shù)富集配體系統(tǒng)進化（SELEX）技術受到配體本質上是一段單鏈 DNA 或 RNA（通常為 20～80 個核苷酸，分通常具有獨特的三維構象，比如莖、凸環(huán)、內環(huán)、三重體、G-四聯(lián)體抗體-抗原的識別和復合物形成的作用原理類似，適配體通過范德華作用、扁平分子的堆積和形狀互補等作用，利用其與目標物之間的高并與目標物結合[31]，適配體構象識別目標物形成適配體目標物復合物。適配體也被稱為“化學抗體”，可作為拮抗劑、激動劑或靶向配體使圖 1-1 有機磷農(nóng)藥抑制膽堿酯酶活性的原理[25]g. 1-1 Mechanism of the inhibition of cholinesterase by organophosphorus pesticide

從而在寡核苷酸池中進化出具有高特異性親和的適配體[43]。如圖 1-3 所示常包含以下幾個步驟：1、初始寡核苷酸池的制備：首先設計和合成由 10序列組成的單鏈 DNA 寡核苷酸池；2、孵育：池中的隨機序列折疊成不同結構，在最佳條件下與目標物進行孵育形成適配體-目標物復合物；3、分濾、親和柱、磁珠和毛細管電泳等方法將未結合序列與目標結合序列分離利用聚合酶鏈式反應（DNA 適配體）或逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RNA 標結合序列，反應產(chǎn)物進入下一輪篩選；5、測序：通過經(jīng)典的 Sanger 測測序方法鑒定富集得到的適配體序列。通常經(jīng)過 8～20 輪的篩選后可以獲適配體，整個 SELEX 過程需要幾周到幾個月的時間。目前，通過 SELEX篩選得到多種目標物分子的高特異性和高親和力的適配體，包括微生物蛋白質、氨基酸、抗生素、金屬離子和熒光染料等。但由于目標物在體外構象通常不同于其天然構象，因此傳統(tǒng) SELEX 技術開發(fā)的適配體在體內是有效的[45]。為了彌補這一缺點，研究人員開發(fā)了一種新的 SELEX 技術體內應用所需的適配體，即細胞 SELEX。該技術使用整個活細胞作為目標胞 SELEX 產(chǎn)生的適配體具有良好的臨床適用性。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3607606