發(fā)布時(shí)間：2022-01-13 03:06

　　本研究以鮑魚內(nèi)臟為原料,使用亞臨界水萃取并輔助酶解制備鮑魚內(nèi)臟酶解物,并對(duì)鮑魚內(nèi)臟亞臨界水萃取物（AVS）及其輔助酶解物（AVSEs）的理化性質(zhì)及其抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定。之后,本研究通過RAW264.7細(xì)胞對(duì)AVS和AVSEs的體外免疫活性進(jìn)行測(cè)定。最后,本研究使用Caco-2細(xì)胞模型對(duì)AVS和AVSEs的體外轉(zhuǎn)運(yùn)吸收情況及轉(zhuǎn)運(yùn)吸收后的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定。首先,本研究使用亞臨界水分別輔助木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶酶解制備水解物。對(duì)其基本成分進(jìn)行測(cè)定后結(jié)果表明,AVS中蛋白質(zhì)和總糖含量分別為38.33%和24.36%。當(dāng)亞臨界水萃取物被進(jìn)一步酶解時(shí),不論采用哪一種酶,其蛋白質(zhì)含量增加而總糖含量減少。氨基酸主要由丙氨酸、甘氨酸和天冬氨酸組成。亞臨界水萃取物的Fe³⁺還原能力、DPPH、ABTS、DMPD和OH自由基清除活性的IC₅₀值分別為2.93、1.48、1.61、3.72和5.51mg/mL。在經(jīng)過進(jìn)一步酶解后,IC₅₀值均出現(xiàn)下降。其中,使用木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶酶解后得到的輔助酶解物DMPD和OH... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

亞臨界水萃取物及其輔助酶解物的分子量分布

碩士學(xué)位論文 亞臨界水輔助酶解鮑魚內(nèi)臟提取物及其體外活數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析得數(shù)據(jù)采用 SPSS 17.0 軟件(SPSS Inc, Chicago, IL, USA)進(jìn)行方差分析(ANO驗(yàn)方法為 Duncan 多重檢驗(yàn)，顯著性水平為 0.05。使用 ELISAcalc 進(jìn)行 TNF-線的繪制，擬合模型選用 logistic 曲線（四參數(shù)）。使用 Microsoft Office Eosoft Office Visio 2013 進(jìn)行作圖。果與討論小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 細(xì)胞生長曲線本研究中，對(duì) RAW264.7 細(xì)胞的生長曲線進(jìn)行繪制，結(jié)果如圖 3-1 所示。由噬細(xì)胞 RAW264.7 在第 2 天至第 5 天處于對(duì)數(shù)生長期。因此，采用培養(yǎng) 2 期的小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

蛋白酶、胰蛋白酶和α-糜蛋白酶水解蛋白得到了三種蛋白水解物，發(fā)現(xiàn)香魚蛋白及其水物在 0.2 mg/mL 時(shí)對(duì) RAW264.7 細(xì)胞增殖活性具有促進(jìn)作用[69]384。鮑魚內(nèi)臟亞臨界水萃物及其輔助酶解物對(duì) RAW264.7 細(xì)胞增殖活性的促進(jìn)作用可能是由于經(jīng)過亞臨界水萃取及木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶酶解后，所得到的氨基酸為 RAW264.7 細(xì)胞增所必需的氨基酸。然而，使用不同濃度的AVSE-B 作用于RAW264.7細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)AVSE-B濃度低于 1.00 mg/mL 時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖活性未表現(xiàn)顯著性作用，且在濃度較高時(shí)對(duì)細(xì)胞會(huì)產(chǎn)顯著性的抑制作用(p<0.05)。因此，當(dāng) AVS 和 AVSEs 濃度低于 0.50 mg/mL 時(shí)，對(duì)W264.7 細(xì)胞未表現(xiàn)出細(xì)胞毒性作用，該結(jié)果與 Meram 等人的研究結(jié)果相似，蛋黃球蛋及其酶解物濃度低于 1600 μg/mL 時(shí)對(duì) RAW264.7 細(xì)胞未表現(xiàn)出顯著性細(xì)胞毒性[106]452。除此之外，在所有 AVSE 中，AVSE-N 在 0.13 mg/mL 和 0.25 mg/mL 濃度下，對(duì)細(xì)胞胞活性的促進(jìn)作用接近 37%。因此，AVSE-N 可作為 RAW264.7 細(xì)胞的增殖刺激因子。次是 AVSE-P 和 AVSE-F，在 0.13-0.50 mg/mL 的濃度下，AVSE-P 和 AVSE-F 分別能促細(xì)胞增殖 10%以上。因此，選用 0.13 mg/mL 和 0.25 mg/mL 的 AVS 和 AVSE 用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3585943