T-2毒素是由多種真菌產(chǎn)生的一種毒性很強(qiáng)的單端孢霉烯族毒素,比較廣泛存在于谷物及飼料中。若人和動(dòng)物食用被T-2毒素污染的谷物或飼料,將會(huì)對(duì)人類和動(dòng)物的健康構(gòu)成潛在危害。免疫分析方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)及操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn),可用于大規(guī)模、快速檢測(cè)T-2毒素的殘留。本論文采用雜交瘤細(xì)胞融合法制備T-2毒素單克隆抗體,通過對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了酶聯(lián)免疫吸附分析法、化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫吸附分析法及免疫親和柱-高效液相色譜法,并對(duì)小麥和玉米等糧谷類食品中T-2毒素進(jìn)行檢測(cè)分析。1.T-2毒素單克隆抗體的制備用人工合成的免疫抗原T-2-BSA免疫Balb/c小鼠,采用電融合法將骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合,成功獲得兩株分泌T-2毒素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞3B2、8C3,其中8C3的競(jìng)爭(zhēng)效果更好,所以選雜交瘤細(xì)胞8C3制備T-2毒素單克隆抗體。采用辛酸-硫酸銨法和蛋白G柱法純化單抗腹水,測(cè)其濃度為3.58 mg/m L。2.酶聯(lián)免疫吸附分析法的建立對(duì)酶聯(lián)免疫吸附分析法反應(yīng)體系中的抗原包被濃度、抗體稀釋比例、酶標(biāo)二抗稀釋比例、甲醇濃度、離子強(qiáng)度、p H等影響因素進(jìn)行優(yōu)化,確定了T-2抗原和T...

【文章來源】： 江西科技師范大學(xué)江西省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 T-2毒素的概述
        1.1.1 T-2毒素的理化性質(zhì)
        1.1.2 T-2毒素的毒性作用
    1.2 T-2毒素的相關(guān)法規(guī)
    1.3 T-2毒素的來源
    1.4 T-2毒素分析檢測(cè)方法的研究
        1.4.1 生物檢測(cè)方法
        1.4.2 薄層色譜法
        1.4.3 高效液相色譜法及其聯(lián)用技術(shù)
        1.4.4 氣相色譜及其聯(lián)用技術(shù)
        1.4.5 免疫學(xué)檢測(cè)方法
    1.5 本課題的研究目的與主要內(nèi)容
第2章 T-2毒素單克隆抗體的制備
    2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠的免疫
        2.2.2 血清效價(jià)的測(cè)定
        2.2.3 血清特異性的測(cè)定
    2.3 T-2毒素單克隆抗體制備
        2.3.1 骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備
        2.3.2 小鼠脾臟細(xì)胞的準(zhǔn)備
        2.3.3 細(xì)胞融合
        2.3.4 飼養(yǎng)細(xì)胞的制備
        2.3.5 融合細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.6 雜交瘤細(xì)胞的篩選
        2.3.7 雜交瘤細(xì)胞的克隆化
        2.3.8 雜交瘤細(xì)胞的凍存
        2.3.9 雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.3.10 單克隆抗體的大量生產(chǎn)
        2.3.11 T-2毒素單克隆抗體腹水的純化
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.4.1 免疫小鼠血清效價(jià)的測(cè)定結(jié)果
        2.4.2 雜交瘤細(xì)胞的篩選及克隆化
        2.4.3 單克隆抗體蛋白含量的確定
    2.5 本章小結(jié)
第3章 酶聯(lián)免疫吸附分析法檢測(cè)T-2毒素
    3.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)所用溶液的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 最佳抗原包被濃度的確定
        3.2.2 間接ELISA競(jìng)爭(zhēng)操作步驟
        3.2.3 ELISA反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.5 樣品的加標(biāo)回收
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 抗原包被濃度的確定
        3.3.2 抗體稀釋比例的確定
        3.3.3 酶標(biāo)二抗稀釋比例的確定
        3.3.4 甲醇濃度的確定
        3.3.5 pH的確定
        3.3.6 離子強(qiáng)度的確定
        3.3.7 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立
        3.3.8 樣品的加標(biāo)回收
    3.4 本章小結(jié)
第4章 化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫吸附分析法測(cè)定T-2毒素
    4.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)所用溶液的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 抗原包被濃度的確定
        4.2.2 間接ELISA競(jìng)爭(zhēng)操作步驟
        4.2.3 CLEIA反應(yīng)體系優(yōu)化
        4.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        4.2.5 樣品的加標(biāo)回收
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 抗原包被濃度的確定
        4.3.2 抗體稀釋比的確定
        4.3.3 酶標(biāo)二抗稀釋比的確定
        4.3.4 甲醇濃度優(yōu)化結(jié)果
        4.3.5 pH優(yōu)化結(jié)果
        4.3.6 離子強(qiáng)度優(yōu)化結(jié)果
        4.3.7 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立
        4.3.8 樣品的加標(biāo)回收
    4.4 本章小結(jié)
第5章 T-2毒素免疫親和柱-高效液相色譜法的建立
    5.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 色譜條件
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)所用溶液的配制
        5.2.3 樣品的凈化與洗脫
        5.2.4 衍生化
        5.2.5 樣品的加標(biāo)回收
        5.2.6 實(shí)際樣品的檢測(cè)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
        5.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        5.3.2 樣品的加標(biāo)回收
        5.3.3 ELISA、C LEIA與 HPLC的方法學(xué)比較
        5.3.4 實(shí)際樣品中T-2毒素含量的檢測(cè)
    5.4 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]T-2毒素快速定量檢測(cè)試紙條的研究 [J]. 許會(huì)靜,李玉杰,張馨月,王弘瑞,苗茁,柳玉,李艷,王會(huì)巖,董媛.  食品研究與開發(fā). 2019(19)
[2]醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域中免疫膠體金技術(shù)應(yīng)用研究進(jìn)展 [J]. 李昭林,龍志兵.  中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志. 2018(04)
[3]化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在微生物檢測(cè)中的應(yīng)用 [J]. 李靜雯,劉清珺,杜美紅,趙瑞雪,萬(wàn)宇平,吳小勝,馮月君.  分析測(cè)試學(xué)報(bào). 2017(11)
[4]T-2毒素對(duì)BALB/c小鼠營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率及小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 [J]. 楊俊花,陳慧英,韓薇,趙志輝,孫真真,郭文博.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(09)
[5]對(duì)蝦中T-2毒素對(duì)小鼠免疫功能和血清生化指標(biāo)的影響 [J]. 吳朝金,王雅玲,孫力軍,徐德峰,張永平,勵(lì)建榮.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2015(05)
[6]小分子物質(zhì)酶聯(lián)免疫分析方法的研究進(jìn)展 [J]. 詹屋強(qiáng),王弘.  食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2015(03)
[7]化學(xué)發(fā)光免疫分析與酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè)水產(chǎn)品藥物殘留的比較研究 [J]. 薩仁托雅,張峰,鄭有虎,盧亞楠.  大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(05)
[8]間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)谷物中T-2毒素 [J]. 唐世云,武玉香,曲光剛,付石軍,沈志強(qiáng).  中國(guó)糧油學(xué)報(bào). 2014(06)
[9]T-2毒素對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞相關(guān)功能基因mRNA表達(dá)的影響 [J]. 楊建英,張勇法,白雪飛,符志鵬,辛淑文,閆彬.  環(huán)境與健康雜志. 2014(06)
[10]T-2毒素檢測(cè)方法及其毒性研究進(jìn)展 [J]. 趙秋爽,闞建全.  糧食與油脂. 2014(06)

碩士論文
[1]T-2毒素對(duì)BALB/c小鼠的毒性作用和對(duì)HL-7702細(xì)胞的毒性效應(yīng)機(jī)制研究[D]. 陳慧英.上海海洋大學(xué) 2015
[2]谷物與飼料中T-2毒素免疫檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 李靜.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[3]T-2毒素多克隆抗體的制備及其化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)的初步研究[D]. 徐娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]T-2毒素對(duì)長(zhǎng)沙黃雞免疫功能的毒性影響及其控毒試驗(yàn)研究[D]. 袁莉蕓.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



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