殼聚糖誘導(dǎo)提高膠紅酵母對(duì)草莓采后病害防治效力的分子機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-11-15 10:18
草莓在運(yùn)輸和貯藏過(guò)程中易受病原菌侵染,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。課題組前期研究表明,殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)能提高Rhodotorula mucilaginosa對(duì)草莓采后病害的防治效力,并對(duì)其生理機(jī)制進(jìn)行了研究報(bào)道,但分子機(jī)制尚不明確。本論文利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),結(jié)合生物信息學(xué)分析,從拮抗酵母菌和草莓兩個(gè)角度出發(fā),分別探究了殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)提高R.mucilaginosa拮抗效力和草莓抗病性的分子機(jī)制,從而揭示殼聚糖誘導(dǎo)提高R.mucilaginosa對(duì)草莓采后病害防治效力的分子機(jī)制。論文主要研究結(jié)果如下:（1）利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)和生物信息學(xué)對(duì)殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)24 h的R.mucilaginosa的差異基因（DEGs）進(jìn)行分析,結(jié)果表明,殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)的R.mucilaginosa共有811個(gè)DEGs注釋到功能,其中424個(gè)上調(diào)表達(dá),387個(gè)下調(diào)表達(dá)。DEGs的功能分析和GO、KEGG富集分析結(jié)果揭示了誘導(dǎo)培養(yǎng)提高R.mucilaginosa拮抗效力的分子機(jī)制主要包括:誘導(dǎo)培養(yǎng)促使生長(zhǎng)繁殖相關(guān)基因、生物膜形成及粘附相關(guān)基因、能量合成相關(guān)基因、抗氧化脅迫及抗其他逆境脅迫相關(guān)基因上調(diào)表達(dá),從而增強(qiáng)其...
【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省
【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
轉(zhuǎn)錄組測(cè)序試驗(yàn)流程圖（R.mucilaginosa）
殼聚糖誘導(dǎo)提高膠紅酵母對(duì)草莓采后病害防治效力的分子機(jī)制研究10圖2.2轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析（R.mucilaginosa）Fig.2.2Bioinformaticsanalysisoftranscriptomedata(R.mucilaginosa)2.2.9DEGs的RT-qPCR驗(yàn)證2.2.9.1cDNA的制備以2.2.7中提取的RNA為模板，采用PrimeScriptRTreagentkitwithgDNAEraser試劑盒（Takara，大連，中國(guó)）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，具體操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)。2.2.9.2差異基因（DEGs）引物實(shí)時(shí)熒光定量PCR所用的DEGs的引物如表2.1所示。表2.1R.mucilaginosaDEGs的引物設(shè)計(jì)表Table2.1PrimerdesignofDEGsinR.mucilaginosaGeneIDGeneNameForwardprimer(5’to3’)Reversprimer(5’to3’)TRINITY_DN4697_c1_g1MAPKGGAGAAGCAACCGAGGCATTACTCCGAGGAGGGATGACAGGAAGAGGTRINITY_DN3051_c0_g1MID2CCACTGCTCCTTGAAGACGCTATGCCGTGTCGTCCCTTCCCTCTGTRINITY_DN3840_c0_g1Slt2AGCAACCAGAACCAGCAGCAAGCGCAACCGACCGACCAGATGTRINITY_DN5110_c0_g1FKS1ACCTCGCCTCGCAGACCTTCAGCCGAAGATGAGGAGCCAGAGTRINITY_DN4968_c0_g1cat-1CTCGGAGGAGCAGGAGCAGACGTAGTTGGTCGGGTTGCGGTTC
殼聚糖誘導(dǎo)提高膠紅酵母對(duì)草莓采后病害防治效力的分子機(jī)制研究12表2.2RT-qPCR反應(yīng)體系Table2.2ThereactionsystemofRT-qPCR試劑體積(μL)ddH2O4.0SYBRGreen10.0Primer-F2.0Primer-R2.0cDNA2.0Total202.3結(jié)果與分析2.3.1誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)R.mucilaginosa防治草莓采后灰霉病效果的影響如圖2.3和2.4所示，與未誘導(dǎo)培養(yǎng)的R.mucilaginosa處理組相比較，殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)不同時(shí)間的R.mucilaginosa處理的草莓灰霉病發(fā)病率及腐爛直徑均顯著降低，尤其是誘導(dǎo)培養(yǎng)24h的R.mucilaginosa對(duì)草莓灰霉病的控制效果最好，發(fā)病率僅為35%，腐爛直徑僅為10.52mm。該結(jié)果表明，殼聚糖作為激發(fā)子，誘導(dǎo)培養(yǎng)R.mucilaginosa能顯著提高其防治草莓灰霉病的效力，且誘導(dǎo)培養(yǎng)24h腐爛率和腐爛直徑最低，其防治效果最好。圖2.3誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)R.mucilaginosa處理的草莓灰霉病發(fā)病率的影響Fig.2.3EffectsofinducingincubationtimeonthediseaseincidenceofgraymoldofstrawberriestreatedwithR.mucilaginosa注：YA，YB分別為未誘導(dǎo)培養(yǎng)和殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)的R.mucilaginosa，濃度為1×108cells/mL。不同字母代表差異顯著性（p<0.05）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于新一代高通量測(cè)序技術(shù)分析拮抗酵母Cryptoccocus laurentii誘導(dǎo)處理櫻桃番茄果實(shí)后轉(zhuǎn)錄組學(xué)的變化[J]. 唐瓊,鄭曉冬. 食品科學(xué). 2019(18)
[2]小麥翻譯控制腫瘤蛋白（TCTP）與索馬甜類蛋白（TLP）的相互作用[J]. 麻楠,喬金柱,孫天杰,李?yuàn)?魏鳳菊,王冬梅. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]擬南芥轉(zhuǎn)錄因子Ethylene-insensitive3（EIN3）抑制花青素的合成[J]. 徐夢(mèng)珂,李丹,孟來(lái)生,蔣繼宏. 植物研究. 2018(01)
[4]植物黃酮醇生物合成及其調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 曹運(yùn)琳,邢夢(mèng)云,徐昌杰,李鮮. 園藝學(xué)報(bào). 2018(01)
[5]轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在生物測(cè)序中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 賈昌路,張瑤,朱玲,張銳. 分子植物育種. 2015(10)
[6]香蕉果實(shí)冷脅迫相關(guān)MaWRKY11轉(zhuǎn)錄因子的特性、互作蛋白篩選與鑒定[J]. 徐群剛,鄺健飛,單偉,陸旺金,陳建業(yè). 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào). 2015(05)
[7]轉(zhuǎn)錄因子對(duì)木質(zhì)素生物合成調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 郭光艷,柏峰,劉偉,秘彩莉. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(07)
[8]藍(lán)莓花青素的抗氧化作用和抑菌性研究[J]. 郝文博,姜廣明,車(chē)文實(shí). 黑河學(xué)院學(xué)報(bào). 2014(03)
[9]轉(zhuǎn)錄組與RNA-Seq技術(shù)[J]. 張春蘭,秦孜娟,王桂芝,紀(jì)志賓,王建民. 生物技術(shù)通報(bào). 2012(12)
[10]草莓采后真菌病害控制研究進(jìn)展[J]. 楊書(shū)珍,柳麗梅,彭麗桃,周厚成,潘思軼,張麗華. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(01)
博士論文
[1]西藏羅倫隱球酵母對(duì)水果采后病害的防治效果及相關(guān)機(jī)理研究[D]. 胡浩.浙江大學(xué) 2016
[2]幾丁質(zhì)對(duì)海洋酵母Rhodosporidium paludigenum果實(shí)采后病害防治效力的影響及相關(guān)機(jī)理研究[D]. 盧黃娉.浙江大學(xué) 2015
[3]果實(shí)對(duì)酵母拮抗菌和外源水楊酸誘導(dǎo)的抗病性應(yīng)答機(jī)理[D]. 產(chǎn)祝龍.中國(guó)科學(xué)院研究生院（植物研究所） 2006
[4]酵母菌的分離、篩選以及對(duì)柑橘保鮮的機(jī)理研究[D]. 龍超安.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
碩士論文
[1]β-葡聚糖誘導(dǎo)提高Cryptococcus podzolicus對(duì)蘋(píng)果青霉病的防治效力及其機(jī)制研究[D]. 王蕓.江蘇大學(xué) 2018
[2]擬南芥乙醇脫氫酶ADH的抗病性功能研究[D]. 魏云竹.蘭州大學(xué) 2017
[3]生防酵母（Candida diversa）形態(tài)變化及金屬離子提高其發(fā)酵生物量和生防效力的研究[D]. 李光坤.合肥工業(yè)大學(xué) 2017
[4]解脂亞羅酵母對(duì)蘋(píng)果采后病害生防效力及誘導(dǎo)蘋(píng)果抗性相關(guān)基因影響的研究[D]. 陳亮亮.江蘇大學(xué) 2016
[5]苯乙醇對(duì)柑橘青霉及生防菌34-9的作用研究[D]. 方靜凡.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
本文編號(hào)：3496584
【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
轉(zhuǎn)錄組測(cè)序試驗(yàn)流程圖（R.mucilaginosa）
殼聚糖誘導(dǎo)提高膠紅酵母對(duì)草莓采后病害防治效力的分子機(jī)制研究10圖2.2轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析（R.mucilaginosa）Fig.2.2Bioinformaticsanalysisoftranscriptomedata(R.mucilaginosa)2.2.9DEGs的RT-qPCR驗(yàn)證2.2.9.1cDNA的制備以2.2.7中提取的RNA為模板，采用PrimeScriptRTreagentkitwithgDNAEraser試劑盒（Takara，大連，中國(guó)）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，具體操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)。2.2.9.2差異基因（DEGs）引物實(shí)時(shí)熒光定量PCR所用的DEGs的引物如表2.1所示。表2.1R.mucilaginosaDEGs的引物設(shè)計(jì)表Table2.1PrimerdesignofDEGsinR.mucilaginosaGeneIDGeneNameForwardprimer(5’to3’)Reversprimer(5’to3’)TRINITY_DN4697_c1_g1MAPKGGAGAAGCAACCGAGGCATTACTCCGAGGAGGGATGACAGGAAGAGGTRINITY_DN3051_c0_g1MID2CCACTGCTCCTTGAAGACGCTATGCCGTGTCGTCCCTTCCCTCTGTRINITY_DN3840_c0_g1Slt2AGCAACCAGAACCAGCAGCAAGCGCAACCGACCGACCAGATGTRINITY_DN5110_c0_g1FKS1ACCTCGCCTCGCAGACCTTCAGCCGAAGATGAGGAGCCAGAGTRINITY_DN4968_c0_g1cat-1CTCGGAGGAGCAGGAGCAGACGTAGTTGGTCGGGTTGCGGTTC
殼聚糖誘導(dǎo)提高膠紅酵母對(duì)草莓采后病害防治效力的分子機(jī)制研究12表2.2RT-qPCR反應(yīng)體系Table2.2ThereactionsystemofRT-qPCR試劑體積(μL)ddH2O4.0SYBRGreen10.0Primer-F2.0Primer-R2.0cDNA2.0Total202.3結(jié)果與分析2.3.1誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)R.mucilaginosa防治草莓采后灰霉病效果的影響如圖2.3和2.4所示，與未誘導(dǎo)培養(yǎng)的R.mucilaginosa處理組相比較，殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)不同時(shí)間的R.mucilaginosa處理的草莓灰霉病發(fā)病率及腐爛直徑均顯著降低，尤其是誘導(dǎo)培養(yǎng)24h的R.mucilaginosa對(duì)草莓灰霉病的控制效果最好，發(fā)病率僅為35%，腐爛直徑僅為10.52mm。該結(jié)果表明，殼聚糖作為激發(fā)子，誘導(dǎo)培養(yǎng)R.mucilaginosa能顯著提高其防治草莓灰霉病的效力，且誘導(dǎo)培養(yǎng)24h腐爛率和腐爛直徑最低，其防治效果最好。圖2.3誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)R.mucilaginosa處理的草莓灰霉病發(fā)病率的影響Fig.2.3EffectsofinducingincubationtimeonthediseaseincidenceofgraymoldofstrawberriestreatedwithR.mucilaginosa注：YA，YB分別為未誘導(dǎo)培養(yǎng)和殼聚糖誘導(dǎo)培養(yǎng)的R.mucilaginosa，濃度為1×108cells/mL。不同字母代表差異顯著性（p<0.05）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于新一代高通量測(cè)序技術(shù)分析拮抗酵母Cryptoccocus laurentii誘導(dǎo)處理櫻桃番茄果實(shí)后轉(zhuǎn)錄組學(xué)的變化[J]. 唐瓊,鄭曉冬. 食品科學(xué). 2019(18)
[2]小麥翻譯控制腫瘤蛋白（TCTP）與索馬甜類蛋白（TLP）的相互作用[J]. 麻楠,喬金柱,孫天杰,李?yuàn)?魏鳳菊,王冬梅. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]擬南芥轉(zhuǎn)錄因子Ethylene-insensitive3（EIN3）抑制花青素的合成[J]. 徐夢(mèng)珂,李丹,孟來(lái)生,蔣繼宏. 植物研究. 2018(01)
[4]植物黃酮醇生物合成及其調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 曹運(yùn)琳,邢夢(mèng)云,徐昌杰,李鮮. 園藝學(xué)報(bào). 2018(01)
[5]轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在生物測(cè)序中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 賈昌路,張瑤,朱玲,張銳. 分子植物育種. 2015(10)
[6]香蕉果實(shí)冷脅迫相關(guān)MaWRKY11轉(zhuǎn)錄因子的特性、互作蛋白篩選與鑒定[J]. 徐群剛,鄺健飛,單偉,陸旺金,陳建業(yè). 熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào). 2015(05)
[7]轉(zhuǎn)錄因子對(duì)木質(zhì)素生物合成調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 郭光艷,柏峰,劉偉,秘彩莉. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(07)
[8]藍(lán)莓花青素的抗氧化作用和抑菌性研究[J]. 郝文博,姜廣明,車(chē)文實(shí). 黑河學(xué)院學(xué)報(bào). 2014(03)
[9]轉(zhuǎn)錄組與RNA-Seq技術(shù)[J]. 張春蘭,秦孜娟,王桂芝,紀(jì)志賓,王建民. 生物技術(shù)通報(bào). 2012(12)
[10]草莓采后真菌病害控制研究進(jìn)展[J]. 楊書(shū)珍,柳麗梅,彭麗桃,周厚成,潘思軼,張麗華. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(01)
博士論文
[1]西藏羅倫隱球酵母對(duì)水果采后病害的防治效果及相關(guān)機(jī)理研究[D]. 胡浩.浙江大學(xué) 2016
[2]幾丁質(zhì)對(duì)海洋酵母Rhodosporidium paludigenum果實(shí)采后病害防治效力的影響及相關(guān)機(jī)理研究[D]. 盧黃娉.浙江大學(xué) 2015
[3]果實(shí)對(duì)酵母拮抗菌和外源水楊酸誘導(dǎo)的抗病性應(yīng)答機(jī)理[D]. 產(chǎn)祝龍.中國(guó)科學(xué)院研究生院（植物研究所） 2006
[4]酵母菌的分離、篩選以及對(duì)柑橘保鮮的機(jī)理研究[D]. 龍超安.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
碩士論文
[1]β-葡聚糖誘導(dǎo)提高Cryptococcus podzolicus對(duì)蘋(píng)果青霉病的防治效力及其機(jī)制研究[D]. 王蕓.江蘇大學(xué) 2018
[2]擬南芥乙醇脫氫酶ADH的抗病性功能研究[D]. 魏云竹.蘭州大學(xué) 2017
[3]生防酵母（Candida diversa）形態(tài)變化及金屬離子提高其發(fā)酵生物量和生防效力的研究[D]. 李光坤.合肥工業(yè)大學(xué) 2017
[4]解脂亞羅酵母對(duì)蘋(píng)果采后病害生防效力及誘導(dǎo)蘋(píng)果抗性相關(guān)基因影響的研究[D]. 陳亮亮.江蘇大學(xué) 2016
[5]苯乙醇對(duì)柑橘青霉及生防菌34-9的作用研究[D]. 方靜凡.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
本文編號(hào)：3496584
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