隨著人們生活水平的提高,天然防霉劑日益受到重視。煙草、卷煙的霉變是貯煙病害的主要因素,易造成重大經(jīng)濟(jì)損失。而天然植物精油有著廣譜抑菌的特點(diǎn),可以作為一種理想的新型、低毒性、高效的卷煙防霉劑。但肉桂醛等精油活性成分具有易揮發(fā)、易氧化等特點(diǎn),限制了其應(yīng)用,通過(guò)微膠囊包埋技術(shù)可以有效改善上述問(wèn)題。本論文從云煙中分離鑒定出主要的霉變微生物,對(duì)肉桂醛等四種代表性精油活性成分的抑菌效果差異進(jìn)行了比較,并初步探索了肉桂醛的抑菌機(jī)理;在此基礎(chǔ)上,通過(guò)復(fù)合凝聚微膠囊改善了肉桂醛的穩(wěn)定性及抑菌性能,考察了微膠囊化肉桂醛的抑菌穩(wěn)定性,并評(píng)價(jià)了其應(yīng)用于卷煙的防霉效果。通過(guò)平板涂布、真菌形態(tài)學(xué)觀察、顯微鏡檢、18SrDNA-ITS序列測(cè)定的方法,對(duì)云產(chǎn)卷煙中的霉變微生物進(jìn)行分離、純化和鑒定。從霉變成品卷煙中鑒定得到了15株卷煙霉變微生物,發(fā)現(xiàn)引起卷煙霉變的微生物主要為曲霉屬、青霉屬、枝孢屬以及鏈格孢屬。其中,巴西曲霉（Aspergillus brasiliensis）致霉性最強(qiáng),菌落直徑達(dá)到75.67±0.89mm,比較優(yōu)勢(shì)菌株和混合菌的受抑菌特性,明確巴西曲霉為卷煙防霉劑的抑菌效果指示菌。以抑菌圈和最低抑菌濃... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

5株卷煙霉變微生物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

M13 鏈格孢屬 — — — M14 鏈格孢屬 — — — M15 鏈格孢屬 — — — 將 15 株卷煙霉變微生物測(cè)試所得 18SrDNA-ITS 序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。通過(guò) MEGA，采用鄰位相連法（NJ，Neighbor-joining）[100]進(jìn)行進(jìn)化距離分析，運(yùn)用 Bootstrap 對(duì)系統(tǒng)樹進(jìn)行檢驗(yàn)，重復(fù) 1000 次[101]。15 株卷煙霉變微生物系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建結(jié)果如圖 3-3 所示。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，15 株卷煙霉變微生物的 ITS 序列聚為 5 個(gè)分支，劃分為青霉屬、枝孢屬、鏈格孢屬和 2 個(gè)曲霉屬分支。相同屬的進(jìn)化關(guān)系較近，以較高的支持率聚在同一分支，巴西曲霉和黃曲霉與青霉屬的同源性較近，可能來(lái)源于相距較近的類群。

3結(jié)果與討論293.3.3典型精油活性成分對(duì)菌絲形態(tài)變化的影響為了觀察典型精油活性成分之一的肉桂醛對(duì)巴西曲霉菌絲形態(tài)的影響，將生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的霉菌菌絲經(jīng)過(guò)肉桂醛（1.5×MIC）抑菌處理，繼續(xù)生長(zhǎng)1d后，通過(guò)掃描電子顯微鏡觀察，結(jié)果如圖3-8所示。圖3-8肉桂醛處理前后菌絲生長(zhǎng)狀況掃描電鏡照片（A）、（B）、（C）、（D）為正常生長(zhǎng)的巴西曲霉菌絲，（E）、（F）、（G）、（H）為經(jīng)過(guò)1.5×MIC肉桂醛處理過(guò)的巴西曲霉菌絲，標(biāo)尺分別為100.0μm、50.0μm、20.0μm和10.0μmFig.3-8Scanningelectronmicrographofmycelialbeforeandaftercinnamaldehydetreatment.(A),(B),(C),(D)NormalgrowthofhyphaeofAspergillusbrasiliensiswithscalesof100.0μm,50.0μm,20.0μm,10.0μmrespectively;(E),(F),(G),(H)HyphaeofAspergillusbrasiliensistreatedby1.5×MICcinnamaldehydewithscalesof100.0μm,50.0μm,20.0μm,10.0μmrespectively.由圖3-8可知，未經(jīng)肉桂醛抑菌處理的霉菌菌絲菌絲較挺直，具有一定的支撐能力，細(xì)胞膜表面完整、光滑；繼續(xù)培養(yǎng)1d后霉菌菌絲生長(zhǎng)快速且茂密，堆疊層次多，電鏡觀察下景深更深，表明巴西曲霉生長(zhǎng)適應(yīng)力好、繁殖快、致霉性強(qiáng)；在較低倍鏡下觀察，可見有完整的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和部分孢子，具有繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖的能力。但是經(jīng)過(guò)肉桂醛處理后，巴西曲霉菌絲皺縮，菌絲隔膜結(jié)構(gòu)裸露，菌絲形態(tài)改變，表明細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的完整性和通透性受到破壞，這可能與細(xì)胞的滲透失衡有關(guān)[127]。繼續(xù)培養(yǎng)1d后，菌絲數(shù)量增長(zhǎng)緩慢，生長(zhǎng)停滯，堆疊層次少，未完全覆蓋培養(yǎng)基表面；在較低倍鏡下觀察，未見產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)或孢子，表明巴西曲霉可能不再具有繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖的能力。掃描電鏡結(jié)果表明，肉桂醛通過(guò)破壞菌絲細(xì)胞膜，使其菌絲皺縮，生?

【參考文獻(xiàn)】：
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