發(fā)布時(shí)間：2021-11-01 23:04

　　甲基乙二醛（methylglyoxal,MGO）來(lái)源于異常的糖酵解和食物,是晚期糖基化終產(chǎn)物（advanced glycation end products,AGEs）的前體。MGO可與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸發(fā)生非酶促反應(yīng)形成AGEs,MGO與AGEs既可通過(guò)飲食獲得,也可以在體內(nèi)生成。人體中MGO和AGEs的積累參與了多種病理學(xué)的發(fā)展,例如神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病等。隨著人口的老齡化,神經(jīng)退行性疾病發(fā)病率逐年上升,已經(jīng)成為全球性的健康問(wèn)題。抑制MGO和AGEs誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性可能是治療神經(jīng)退行性疾病的潛在方法。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（Epigallocatechin gallate,EGCG）主要來(lái)源于綠茶,有抗氧化、抗炎和抗腫瘤等多種活性,然而EGCG是否能夠抑制MGO和AGEs誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性及抑制AGEs生成需要進(jìn)一步探討。本研究利用大鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞（rat adrenal pheochromocytoma,PC12）模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn),探究EGCG是否能夠抑制MGO和AGEs誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷。通過(guò)MTT法確定EGCG的安全濃度和MGO、AGEs的損傷濃度... 

【文章來(lái)源】：遼寧大學(xué)遼寧省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語(yǔ)表
第1章 引言
    1.1 甲基乙二醛(MGO)
        1.1.1 MGO的體內(nèi)和體外來(lái)源
        1.1.2 MGO體內(nèi)代謝
        1.1.3 MGO的神經(jīng)毒性
    1.2 晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)
        1.2.1 AGEs的種類(lèi)和結(jié)構(gòu)
        1.2.2 AGEs的生成途徑
        1.2.3 AGEs體內(nèi)和體外來(lái)源
        1.2.4 AGEs的代謝
        1.2.5 AGEs的神經(jīng)毒性
    1.3 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)
    1.4 本課題研究意義
    1.5 本課題研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 EGCG抑制MGO對(duì) PC12 細(xì)胞損傷作用研究
        1.5.2 EGCG抑制MGO誘導(dǎo)BSA生成AGEs
        1.5.3 EGCG抑制AGEs對(duì) PC12 細(xì)胞損傷作用研究
第2章 EGCG抑制MGO對(duì) PC12 細(xì)胞損傷作用研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株、生化試劑和耗材
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.2.1.2 細(xì)胞換液
            2.2.1.3 細(xì)胞傳代
            2.2.1.4 細(xì)胞凍存
        2.2.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.3 EGCG濃度的選擇
        2.2.4 MGO濃度的選擇
        2.2.5 細(xì)胞分組
        2.2.6 細(xì)胞存活率檢測(cè)
        2.2.7 ROS水平檢測(cè)
        2.2.8 線粒體膜電位檢測(cè)
        2.2.9 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.10 細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.11 細(xì)胞總蛋白濃度測(cè)定
        2.2.12 細(xì)胞核蛋白提取
        2.2.13 細(xì)胞核蛋白濃度測(cè)定
        2.2.14 蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)
        2.2.15 數(shù)據(jù)分析
    2.3 研究結(jié)果
        2.3.1 EGCG安全濃度的確定
        2.3.2 MGO濃度的確定
        2.3.3 EGCG對(duì) MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞存活率降低的影響
        2.3.4 EGCG對(duì) MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞ROS水平升高的影響
        2.3.5 EGCG對(duì) MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞線粒體膜電位水平降低的影響
        2.3.6 EGCG對(duì) MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞凋亡的影響
        2.3.7 EGCG對(duì) MGO誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞GLO1 蛋白表達(dá)的影響
        2.3.8 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞MAPK信號(hào)通路的影響
        2.3.9 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響
        2.3.10 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響
        2.3.11 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞ERK/CREB/BDNF信號(hào)通路的影響
    2.4 討論與小結(jié)
第3章 EGCG抑制AGEs生成研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 生化試劑和耗材
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟
        3.2.1 BSA-MGO體系建立
        3.2.2 熒光光譜測(cè)定
        3.2.3 紫外光譜測(cè)定
        3.2.4 圓二色譜測(cè)定
        3.2.5 分子對(duì)接
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
    3.3 研究結(jié)果
        3.3.1 AGEs檢測(cè)
        3.3.2 EGCG對(duì) AGEs形成的抑制作用
        3.3.3 EGCG與 BSA的分子對(duì)接研究
    3.4 討論與小結(jié)
第4章 EGCG抑制AGEs對(duì) PC12 細(xì)胞損傷作用研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞株、生化試劑和耗材
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
        4.1.3 試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 制備AGEs
        4.2.3 EGCG濃度的選擇
        4.2.4 AGEs濃度的選擇
        4.2.5 細(xì)胞分組
        4.2.6 細(xì)胞存活率檢測(cè)
        4.2.7 ROS水平檢測(cè)
        4.2.8 線粒體膜電位檢測(cè)
        4.2.9 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        4.2.10 細(xì)胞總蛋白提取
        4.2.11 細(xì)胞總蛋白濃度測(cè)定
        4.2.12 細(xì)胞核蛋白提取
        4.2.13 細(xì)胞核蛋白濃度測(cè)定
        4.2.14 蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)
        4.2.15 數(shù)據(jù)分析
    4.3 研究結(jié)果
        4.3.1 AGEs濃度的確定
        4.3.2 EGCG對(duì) AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞存活率降低的影響
        4.3.3 EGCG對(duì) AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞ROS水平升高的影響
        4.3.4 EGCG對(duì) AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞線粒體膜電位水平降低的影響
        4.3.5 EGCG對(duì) AGEs誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.6 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞RAGE蛋白表達(dá)的影響
        4.3.7 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞MAPK信號(hào)通路的影響
        4.3.8 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響
        4.3.9 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響
        4.3.10 EGCG對(duì) PC12 細(xì)胞ERK/CREB/BDNF信號(hào)通路的影響
    4.4 討論與小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]EGCG緩解丙烯酰胺誘導(dǎo)的大鼠肝臟及神經(jīng)損傷機(jī)理研究[D]. 賀音.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]肉類(lèi)熱加工過(guò)程中晚期糖基化終末產(chǎn)物的形成及其內(nèi)外源影響因素[D]. 孫曉華.上海海洋大學(xué) 2016
[4]晚期糖基化終末產(chǎn)物通過(guò)線粒體功能障礙和Fas-FasL途徑誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D]. 王璞.武漢大學(xué) 2016
[5]跨血腦屏障的重組人PTD-BDNF的制備及生物學(xué)作用[D]. 周建平.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2007

碩士論文
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[2]香菇菌絲體多糖對(duì)糖毒性所致胰島β細(xì)胞損傷保護(hù)作用研究[D]. 劉丹.遼寧大學(xué) 2019
[3]花旗松素抑制六價(jià)鉻Cr（Ⅵ）誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷及細(xì)胞粘附作用研究[D]. 王帥.遼寧大學(xué) 2019
[4]淫羊藿次苷Ⅱ抗氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷作用及機(jī)制研究[D]. 馮琳穎.遵義醫(yī)學(xué)院 2018
[5]綠茶中晚期糖基化終產(chǎn)物含量調(diào)查及其生成影響因素研究[D]. 李鳳麗.江南大學(xué) 2016
[6]甲基乙二醛誘導(dǎo)EA.hy926細(xì)胞線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放的機(jī)制[D]. 穆潁潁.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[7]硫化氫對(duì)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的探討[D]. 楊絲絲.南華大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3470856