鈣是人體必需的礦物質(zhì)營養(yǎng)素,膳食中鈣攝入或吸收不足會導(dǎo)致許多疾病。金屬螯合肽對改善礦物元素缺乏存在潛在應(yīng)用價值,近年來越來越多具有提高和促進礦物元素生物利用率的金屬螯合肽被發(fā)現(xiàn)和鑒定。食物源螯合肽由于其具有營養(yǎng)、安全等特性,因此已經(jīng)被被用于鈣強化相關(guān)的功能食品和保健品的開發(fā)。本實驗以碎米為原料制備米蛋白,采用堿性蛋白酶制備具有鈣螯合能力的米蛋白肽,通過體積排阻色譜和反向高效液相色譜對螯合物進行分離純化,并用質(zhì)譜對其測序,最后通過細胞實驗驗證了螯合物的鈣生物利用率。具體研究結(jié)果如下:（1）采用超聲輔助提取米蛋白,以最適蛋白酶制備米蛋白肽,并通過超濾獲得鈣結(jié)合能力較高的肽段。結(jié)果表明:超聲波輔助提取米蛋白的最佳工藝條件為:料液比1:12,超聲時間40 min,提取溫度60℃,pH 9.5。在此條件下,米蛋白的提取率為67.01%;分別選用堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解米蛋白,以金屬螯合力和水解度為指標篩選最適蛋白酶,結(jié)果顯示堿性蛋白酶的金屬螯合力及水解度均最高,分別為67%、16.89%;米蛋白酶解最佳工藝為:溫度63.7℃、底物質(zhì)量分數(shù)4.4%、酶添加量6.8%、pH... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

酶由于作用點的不同，水解后的肽段也具有不同的生物活性的生物活性肽具有重要的作用，酶的作用點不同會含有大量的具有生物活性的氨基酸序列，本實驗選用 4 水解度、金屬螯合力為指標，篩選出最適蛋白酶。白酶對米蛋白酶解物的水解度的影響，四種酶對米蛋白的水解效果存在較大的差異，但水解度符合酶的典型反應(yīng)過程曲線。在酶解的前 30 min，水解初期水解速度較快造成的，在反應(yīng) 30~60 min，堿性蛋白，其他三種酶相對較弱；反應(yīng)時間為 60~90 min時，除堿度皆趨于平緩，堿性蛋白酶直到水解時間為 180 min時才酶具有較高的酶活力，對米蛋白的水解作用強。這是因鍵有較強的專一性[85]。

米蛋白肽-鈣螯合物的制備及其性質(zhì)研究酶解時間的增長，暴露出來的肽段也越多，促進了螯合反降趨勢，是因為一些多肽被繼續(xù)降解為游離氨基酸而造成解物的金屬螯合力均不相同，堿性蛋白酶的酶解液的螯合酶的切位點不同，造成水解后多肽的的氨基酸組成和排列響了肽的功能特性。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同分子質(zhì)量的大豆肽螯合鈣工藝優(yōu)化[J]. 劉靜波,劉暢,趙頌寧,張婷.  中國食品學(xué)報. 2018(06)
[2]綠豆中ACE抑制肽的分離純化及抗氧化研究[J]. 鄒基豪,劉振春,李俠.  食品工業(yè). 2018(01)
[3]微波輔助酶法制備的玉米抗氧化肽的抗氧化活性分析[J]. 關(guān)海寧,刁小琴,趙鳳影,于新月,張波,張菊靈,張子艷.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(08)
[4]黃鯽蛋白水解液美拉德反應(yīng)物的抑菌性及抗氧化性研究[J]. 楊珮瑜,劉冬梅,阮關(guān)強,韋榮編,宋茹,羅紅宇.  中國食品學(xué)報. 2016(04)
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[7]玉米醇溶蛋白肽鈣螯合物的制備及其抑菌性能研究[J]. 蒲傳奮,唐文婷.  食品科技. 2015(12)
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[10]響應(yīng)面法優(yōu)化物理輔助堿法提取米糠蛋白工藝[J]. 許鳳,王長遠.  食品科學(xué). 2014(20)

博士論文
[1]麥胚蛋白聚集行為及其鈣離子螯合肽的制備與評價[D]. 劉鳳茹.江南大學(xué) 2014

碩士論文
[1]黑木耳肽鈣螯合物對模擬微重力誘導(dǎo)骨流失防護作用研究[D]. 曲航.哈爾濱工業(yè)大學(xué) 2016
[2]米渣蛋白的分離提取、改性及功能特性研究[D]. 曾國強.武漢輕工大學(xué) 2016
[3]脫酰胺—酶解法制備米蛋白肽及其亞鐵螯合物的研究[D]. 廉雯蕾.江南大學(xué) 2015
[4]普通野生稻種子貯藏蛋白質(zhì)多態(tài)性研究[D]. 盧夏茹.海南大學(xué) 2015
[5]水解米渣蛋白及制備氨基酸螯合鈣的工藝研究[D]. 郭艷.四川大學(xué) 2006



本文編號：3061260