日本黃姑魚（Nibea japonica）,俗稱黑毛鲿,屬于黃姑魚屬,主要分布在中國東海和日本南部海。日本黃姑魚味道鮮美,營養(yǎng)豐富,但作為蛋白來源用于提取制備免疫活性肽的研究鮮為報道。本文以日本黃姑魚魚肉為原料,用酶解法提取日本黃姑魚肉粗肽,經過超濾比較各截留組分的免疫活性,將免疫活性最高的<1 kDa的組分命名為日本黃姑魚肉活性肽（Nibea japonica peptides,NJP）。研究NJP在體內體外水平的免疫調節(jié)作用,最后將NJP經DEAE Sepharose Fast Flow陰離子柱,Sephadex G25凝膠柱和RP-HPLC進行進一步的分離純化。結果表明:（1）酶解法提取日本黃姑魚肉粗肽的最佳用酶為木瓜蛋白酶。通過單因素及響應面優(yōu)化,最優(yōu)提取工藝參數(shù)為:料液比1:11 g/mL、pH 6、溫度59°C、時間5.4 h。在此條件下,酶解肽對巨噬細胞RAW 264.7的相對增殖率為62.3%。（2）探討NJP對巨噬細胞RAW 264.7的免疫調節(jié)作用。NJP對細胞無明顯毒性,并且可顯著提高巨噬細胞的增殖能力、吞噬功能、NO分泌量以及細胞因子（IL-6、IL-1β... 

【文章來源】：浙江海洋大學浙江省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略語
第一章 前言
    1.1 海洋生物活性肽的概述
    1.2 海洋生物活性肽的功能
        1.2.1 免疫調節(jié)作用
        1.2.2 抗氧化作用
        1.2.3 降血壓作用
        1.2.4 抗癌作用
    1.3 免疫活性肽
        1.3.1 免疫活性肽的制備
        1.3.2 免疫活性肽分離純化
    1.4 本課題研究的意義及內容
        1.4.1 本課題研究的意義
        1.4.2 本課題研究的主要內容
第二章 日本黃姑魚肉活性肽酶解工藝研究
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 儀器與設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 日本黃姑魚肉粗肽提取工藝流程
        2.2.4 日本黃姑魚肉粗肽的酶解制備
    2.3 結果與分析
        2.3.1 蛋白酶的篩選
        2.3.2 單因素試驗
        2.3.3 響應面試驗
        2.3.4 驗證實驗
    2.4 討論
第三章 日本黃姑魚肉活性肽對巨噬細胞RAW264.7 的免疫調節(jié)作用的研究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 材料與試劑
        3.1.2 儀器與設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 日本黃姑魚肉粗肽的制備
        3.2.3 日本黃姑魚肉粗肽的分子量分布測定
        3.2.4 NJP的制備
        3.2.5 NJP對巨噬細胞RAW264.7 的免疫作用
        3.2.6 數(shù)據處理
    3.3 結果與分析
        3.3.1 日本黃姑魚肉粗肽分子量分布的測定
        3.3.2 NJP的制備
        3.3.3 NJP對細胞受損的影響
        3.3.4 NJP檢測細胞增殖實驗
        3.3.5 NJP對細胞形態(tài)變化的影響
        3.3.6 中性紅測定NJP對巨噬細胞RAW264.7 吞噬的影響
        3.3.7 NJP對巨噬細胞RAW264.7 分泌NO的影響
        3.3.8 NJP對巨噬細胞RAW264.7 分泌細胞因子的影響
        3.3.9 NJP對巨噬細胞RAW264.7 周期的影響
    3.4 結論與討論
第四章 日本黃姑魚肉活性肽對環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影響
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 材料與試劑
        4.1.2 儀器與設備
        4.1.3 實驗動物
    4.2 方法
        4.2.1 模型的建立與分組
        4.2.2 NJP對小鼠體重的影響
        4.2.3 NJP對小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響
        4.2.4 NJP對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響
        4.2.5 NJP對小鼠脾淋巴細胞體外增殖的影響
        4.2.6 遲發(fā)型變態(tài)反應
        4.2.7 NJP對小鼠血清中IL-2、IFN-γ和 TNF-α含量的檢測
        4.2.8 NJP對小鼠血清中免疫球蛋白檢測
        4.2.9 小鼠體內抗氧化活性的檢測
        4.2.10 數(shù)據處理
    4.3 結果與分析
        4.3.1 NJP對小鼠體重的影響
        4.3.2 NJP對小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響
        4.3.3 NJP對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響
        4.3.4 NJP對小鼠脾淋巴細胞體外增殖的影響
        4.3.5 NJP對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響
        4.3.6 NJP對小鼠血清中IL-2、IFN-γ和 TNF-α含量的檢測
        4.3.7 NJP對小鼠血清免疫球蛋白檢測
        4.3.8 小鼠體內抗氧化活性的檢測
    4.4 結論與討論
第五章 日本黃姑魚肉活性肽分離純化
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 材料與試劑
        5.1.2 儀器與設備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 日本黃姑魚肉粗肽的提取
        5.2.2 NJP的制備
        5.2.3 巨噬細胞RAW264.7 增殖實驗
        5.2.4 DEAE Sepharose Fast Flow陰離子柱層析分離
        5.2.5 Sephadex G-25 凝膠柱層析分離
        5.2.6 高效液相分離純化
        5.2.7 目標肽的N端測序
        5.2.8 實驗數(shù)據處理
    5.3 結果與分析
        5.3.1 DEAE Sepharose Fast Flow陰離子柱層析分離結果
        5.3.2 Sephadex G-25 凝膠柱層析分離結果
        5.3.3 高效液相分離純化結果
    5.4 結果與討論
第六章 結論與展望
    6.1 結論
    6.2 研究的創(chuàng)新點
    6.3 進一步研究
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的學術論文及研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3047075