沙門氏菌（Salmonella）是一種廣泛存在于肉類、牛奶、雞蛋和蔬菜等食品中的食源性致病菌,該菌被歐洲疾病預(yù)防與控制中心列為世界上第二大的食物中毒元兇,現(xiàn)已被報(bào)道的Salmonella有2500多種血清型,其感染人類癥狀表現(xiàn)為惡心嘔吐、腹痛腹瀉、頭痛發(fā)熱等,建立快速靈敏的檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)對(duì)該菌的有效監(jiān)控具有重要意義�；陔s交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Hybridization chain reaction,HCR）的熒光信號(hào)放大方法因操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、靈敏度高,受到研究者們的廣泛關(guān)注。本研究構(gòu)建了基于HCR的熒光生物傳感器,實(shí)現(xiàn)了對(duì)食品中Salmonella快速靈敏的檢測(cè),為我國(guó)食源性致病菌的監(jiān)測(cè)體系提供了新的技術(shù)手段。各章內(nèi)容分述如下:第一章綜述了核酸雜交介導(dǎo)的熒光信號(hào)放大方法在生物檢測(cè)中應(yīng)用的研究進(jìn)展。第二章建立了兩種基于HCR和磁珠的新方法用于檢測(cè)Salmonella,該方法通過生物素標(biāo)記的DNA探針（bio-probe）將不對(duì)稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Asymmetry polymerase chain reaction,aPCR）獲得的目標(biāo)單鏈DNA（Single stranded DNA,ssDN... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

幾種HCR介導(dǎo)的熒光信號(hào)放大方法

方法提取細(xì)菌 DNA，并將其作為模板按照 2.3.4 所示方法進(jìn)行 aPCR。（4）按照 2.3.10.2 檢測(cè)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，最后通過酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光分析。4結(jié)果與討論.1引物濃度優(yōu)化結(jié)果aPCR 是利用不等量的上下游引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，從而獲得大量特定 ssDNA技術(shù)，其中上下游引物濃度比例為影響 ssDNA 產(chǎn)量的重要因素，因此本實(shí)驗(yàn)上下游引物濃度比進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果如圖 2-1。圖 2-1 分別顯示了上下游物濃度比為 1:40、1:30、1:20、1:10、1:1、10:1、20:1、30:1、40:1 時(shí)的 aPCR果，其中每個(gè)實(shí)驗(yàn)組固定非限制性引物濃度為 1.2 μM，從圖中可以看出，當(dāng)游引物作為非限制性引物時(shí)，ssDNA 片段更清晰，而當(dāng)上下游引物濃度比為:1 時(shí)，ssDNA 條帶最亮，因此選擇 10:1 作為最佳上下游引物濃度比，即上下引物濃度分別為 1.2 μM 和 0.12 μM。

圖 2.3 HCR 可行性驗(yàn)證Figure 2.3 The feasibility verification of HCR HCR結(jié)合磁珠的熒光修飾法檢測(cè)Salmonella.1實(shí)驗(yàn)原理HCR 結(jié)合磁珠的熒光修飾法原理圖如圖 2.4。該實(shí)驗(yàn)根據(jù) Salmonella 的序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，并通過控制 aPCR 過程中上下游引物濃度菌存在情況下產(chǎn)生大量特定序列的 ssDNA。通過 NUPACK 軟件對(duì) s級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬，選取 ssDNA 上無自身折疊的末端序列為引發(fā)鏈，設(shè)發(fā)生 HCR 反應(yīng)的 DNA 發(fā)夾探針，以及與 ssDNA 另一末端序列互補(bǔ)配robe。該實(shí)驗(yàn)具體步驟可分為以下五步：（1）通過鏈霉親和素（Strepta與生物素（biotin, bio）的親和作用，將 bio-probe 固定于 SA-MBs 表面A-MBs~bio-probe 復(fù)合物；（2）ssDNA 通過與 bio-probe 結(jié)合被固

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]熒光法在食品理化檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 徐靜,孫興權(quán),韓慧,王丹,李妍,刁文婷,曹際娟.  食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2015(01)
[2]食品中金黃色葡萄球菌多重PCR檢測(cè)方法的研究[J]. 徐曉可,吳清平,張菊梅,周艷紅,楊小鵑.  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2011(01)
[3]熒光標(biāo)記染料[J]. 楊祥宇,宋健,馮榮秀.  化學(xué)通報(bào). 2003(09)

博士論文
[1]用于重金屬離子檢測(cè)的電化學(xué)傳感器研究[D]. 陳晨.華東理工大學(xué) 2013

碩士論文
[1]發(fā)夾型DNA熒光探針設(shè)計(jì)新方法研究[D]. 周文玉.湖南大學(xué) 2011



本文編號(hào)：2948136