研究表明,致腐微生物的腐敗特性表達(dá)與群體感應(yīng)（Quorum sensing,QS）系統(tǒng)密切相關(guān),然而目前研究大多集中在腐敗菌QS系統(tǒng)的表型,而對QS調(diào)控基因的研究相對較少。本文主要以腐敗大菱鲆中分離得到的一株蜂房哈夫尼亞菌為研究對象,利用分子生物學(xué)技術(shù)篩選獲得該菌的QS調(diào)控基因halI/halR,利用分子對接及熒光定量PCR技術(shù)探究不同環(huán)境因素對其表達(dá)情況的影響,并探究該菌對外源信號分子的感受能力;其次,本文使用紫色桿菌（Chromobacterium violaceum）CV026作為生物傳感器菌株,探究香蘭素對該菌QS系統(tǒng)的腐敗表型,并利用熒光定量PCR技術(shù)和分子對接技術(shù)分析香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌（Hafnia alvei）QS系統(tǒng)的作用機(jī)制;最后,將QS抑制劑香蘭素應(yīng)用于冷藏大菱鲆魚片中,驗證其保鮮效果。本文旨在深層次探究腐敗微生物的QS機(jī)制,及QS抑制劑香蘭素的作用機(jī)制,為建立靶向控制腐敗微生物QS為基礎(chǔ)的水產(chǎn)品保鮮技術(shù)提供理論依據(jù)。主要結(jié)論如下:1.通過對蜂房哈夫尼亞菌進(jìn)行16S rRNA鑒定,并利用BLAST方法篩選并驗證蜂房哈夫尼亞菌QS的調(diào)控基因halI/halR。2.... 

【文章來源】：渤海大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 細(xì)菌群體感應(yīng)概況
        1.1.1 革蘭氏陰性菌的群體感應(yīng)信號分子
        1.1.2 革蘭氏陽性菌群體感應(yīng)系統(tǒng)
        1.1.3 LuxS/AI-2介導(dǎo)的群體感應(yīng)系統(tǒng)
        1.1.4 其他群體感應(yīng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)
    1.2 群體感應(yīng)與水產(chǎn)品腐敗
        1.2.1 水產(chǎn)品中優(yōu)勢腐敗菌
        1.2.2 群體感應(yīng)對水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)的影響
    1.3 群體感應(yīng)抑制
        1.3.1 天然群體感應(yīng)抑制劑
        1.3.2 人工合成類群體感應(yīng)抑制劑
        1.3.3 群體感應(yīng)淬滅酶
        1.3.4 群體感應(yīng)抑制劑應(yīng)用
    1.4 分子對接技術(shù)
        1.4.1 分子對接概述
        1.4.2 分子對接技術(shù)的分類
        1.4.3 分子對接的應(yīng)用
    1.5 研究內(nèi)容及意義
第二章 蜂房哈夫尼亞菌群體感應(yīng)信號分子halI/halR基因的篩選及驗證
    2.1 前言
    2.2 主要材料與儀器
        2.2.1 菌株活化
        2.2.2 主要試劑和儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 引物設(shè)計
        2.3.2 引物合成
        2.3.3 DNA提取
        2.3.4 PCR擴(kuò)增
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 蜂房哈夫尼亞菌群體感應(yīng)調(diào)控基因halI/halR的驗證
        2.4.2 產(chǎn)物測序及比對
    2.5 本章小結(jié)
第三章 不同環(huán)境及信號分子對蜂房哈夫尼亞菌群體感應(yīng)halI/halR系統(tǒng)表達(dá)情況的影響
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗菌株
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 菌株活化
        3.3.2 引物設(shè)計及合成
        3.3.3 DNA提取
        3.3.4 引物適用性檢測
        3.3.5 RNA提取及質(zhì)量檢測
        3.3.6 cDNA合成
        3.3.7 熒光定量PCR
        3.3.8 不同環(huán)境對蜂房哈夫尼亞菌halI/R系統(tǒng)表達(dá)的影響
        3.3.9 分子對接探究不同類型外源AHLs對受體蛋白HalR的影響
    3.4 數(shù)據(jù)分析
    3.5 結(jié)果與分析
        3.5.1 熒光定量PCR引物檢測
        3.5.2 不同環(huán)境及AHLs對蜂房哈夫尼亞菌halI/R系統(tǒng)表達(dá)情況的影響
        3.5.3 分子對接分析
    3.6 本章小結(jié)
第四章 香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌群體感應(yīng)抑制作用及其機(jī)制的研究
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 試驗菌株
        4.2.2 試劑與儀器
    4.3 方法
        4.3.1 報告平板法檢測QSI及紫色菌素的定量分析
        4.3.2 香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌生物被膜形成的影響
        4.3.3 香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌群集和泳動的影響
        4.3.4 GC-MS定量分析香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌分泌AHLs的影響
        4.3.5 RTq-PCR檢測香蘭素對halI/halR基因表達(dá)情況的影響
        4.3.6 分子對接
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 抗QS活性檢測
        4.4.2 香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌生物被膜形成的影響
        4.4.3 香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌群集和泳動的影響
        4.4.4 GC-MS定量分析香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌產(chǎn)AHLs的影響
        4.4.5 香蘭素對蜂房哈夫尼亞菌QS調(diào)控基因halI/halR表達(dá)量的影響
        4.4.6 分子對接分析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 群體感應(yīng)抑制劑香蘭素對冷藏大菱鲆魚片保鮮效果
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 材料與菌種
    5.3 試驗方法
        5.3.1 蜂房哈夫尼亞菌菌懸液的制備
        5.3.2 無菌魚片的制備
        5.3.3 接種于貯藏試驗
        5.3.4 菌落總數(shù)的測定
        5.3.5 揮發(fā)性鹽基氮（TVB-N）和pH的測定
        5.3.6 揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)（SPME/GC-MS）的測定
        5.3.7 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 菌落總數(shù)分析
        5.4.2 TVB-N和 pH分析
        5.4.3 揮發(fā)性氣味分析
    5.5 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論、創(chuàng)新點和展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點
    6.3 展望
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表論文情況
致謝



本文編號：2923321