中長碳鏈甘油三酯主要有物理混合型(MCT/LCT)和結(jié)構(gòu)脂型(STG),二者總脂肪酸組成相同,脂肪酸在甘油三酯的位置分布不同,且在消化吸收、脂質(zhì)代謝和免疫炎癥等方面存在差異。壽命是衡量健康的綜合指標,研究表明生物體攝食的脂肪酸會影響其壽命,但脂肪酸在甘油三酯的位置分布對壽命的影響鮮有報道。秀麗隱桿線蟲是研究壽命機制的理想模型。然而,秀麗隱桿線蟲水溶性的培養(yǎng)環(huán)境使得其在評價脂質(zhì)營養(yǎng)方面受到限制。因此,本論文利用蛋白乳液包埋技術(shù)向秀麗隱桿線蟲遞送脂質(zhì),評價中長碳鏈甘油三酯結(jié)構(gòu)對秀麗隱桿線蟲壽命的影響。主要內(nèi)容如下:首先,基于蛋白乳液包埋技術(shù)建立了秀麗隱桿線蟲脂質(zhì)遞送方法。采用高壓均質(zhì)的方法制備平均粒徑200-400 nm的蛋白乳液。利用熒光標記方法證明秀麗隱桿線蟲可以成功攝入蛋白乳液。檢測攝食蛋白乳液后秀麗隱桿線蟲的脂肪酸組成來評價乳液粒徑和培養(yǎng)基中油脂濃度對攝入量的影響,結(jié)果表明當乳液粒徑在200-400 nm范圍時,乳液粒徑越小越有利于油脂的遞送;當油脂濃度在0.01-10 mmol/L范圍時,油脂濃度與油脂的遞送量呈正相關(guān)。此外,本文還利用共軛亞油酸甘油三酯進行了方法驗證,結(jié)果顯示蛋白乳液遞送的共軛亞油酸甘油三酯被秀麗隱桿線蟲成功代謝,減少了體內(nèi)脂肪的積累。其次,利用中碳鏈甘油三酯和三油酸甘油三酯酶法酯交換合成STG。對酶法酯交換的加酶量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間進行優(yōu)化,確定最優(yōu)反應(yīng)條件為加酶量6%、反應(yīng)溫度90°C和反應(yīng)時間6 h,產(chǎn)率可以達到70%。檢測STG與MCT/LCT的理化指標,結(jié)果表明相對于MCT/LCT,STG的氧化穩(wěn)定性提高了38.41%,熔點降低了16.44%,甘油三酯的種類增加了24種,sn-2位中碳鏈脂肪酸降低了7.71%,長碳鏈脂肪酸增加了7.71%,飽和和非飽和脂肪酸的比例沒有改變。最后,研究MCT/LCT和STG對秀麗隱桿線蟲壽命的影響。結(jié)果表明MCT/LCT實驗組較STG實驗組秀麗隱桿線蟲的壽命減小了20.19%,脂肪含量增加了15.29%,活性氧增加了28.17%,丙二醛增加了55.99%,超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性分別降低了29.84%和36.28%。谷胱甘肽過氧化物酶活性沒有顯著變化。對秀麗隱桿線蟲壽命相關(guān)的關(guān)鍵基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化進行分析,結(jié)果表明MCT/LCT實驗組較STG實驗組秀麗隱桿線蟲體內(nèi)的編碼AMPKα亞基的基因aak-2的轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)了33.33%,超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的相關(guān)基因sod-3和cat-1的轉(zhuǎn)錄水平分別降低了14.08%和43.16%,而谷胱甘肽過氧化物酶的相關(guān)基因gpx-1、熱量限制通路的關(guān)鍵基因sir-1.2、胰島素及類胰島素信號通路關(guān)鍵基因daf-2和daf-16的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有發(fā)生顯著變化。進一步利用基因缺陷型秀麗隱桿線蟲對上述基因進行了驗證,結(jié)果表明中長碳鏈甘油三酯主要通過改變編碼aak-2基因的轉(zhuǎn)錄水平影響秀麗隱桿線蟲的壽命。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS201.4
【部分圖文】：

第 章 緒 論第一章 緒 論鏈甘油三酯的定義與分類鏈甘油三酯定義為含有中碳鏈脂肪酸（C8-C12）和長碳鏈脂肪酸（C1]。根據(jù)脂肪酸在甘油骨架上的分布，中長碳鏈甘油三酯通常分為CT）和結(jié)構(gòu)脂型（STG），前者是中碳鏈甘油三酯（MCT）和長碳單的物理混合，后者通過化學(xué)法或生物酶法改變甘油骨架上的脂油三酯具有特定分子結(jié)構(gòu)和功能[2]。MCT/LCT 和 STG 總脂肪酸組在甘油三酯的位置分布不 樣，二者甘油三酯組成如圖 1-1 所示，M碳鏈甘油三酯（LLL）和三中碳鏈甘油三酯（MMM），STG 主要含（LML，LLM）和單長碳鏈甘油三酯（MLM，MML）等類型，中脂肪酸在同 個甘油骨架上。

300 nm 300.38 3.2a301.98400 nm 417.66 4.1a427.09注：a 表示 0 h 和 50 h 的平均粒徑和 PDI 沒有顯著2.4.2 蛋白乳液遞送條件的優(yōu)化蛋白乳液粒徑和油脂濃度是影響油脂遞蛋白乳液，研究了秀麗隱桿線蟲攝入乳液后trolnmnmnm020406080100肪酸組成脂%)(

越小越有利于線蟲攝入。Colmenares 等[55]使用吐溫型水包油納米乳液來傳遞親脂性化合物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)秀麗隱桿線蟲對 300-500 nm 粒徑乳液的攝入量最高，這與本實驗的結(jié)論不 致。原因可能是由于 Colmenares 等使用固體瓊脂培養(yǎng)基，小粒徑乳液可能更易滲入瓊脂培養(yǎng)基的內(nèi)部，導(dǎo)致線蟲攝入困難。本實驗采用液態(tài)培養(yǎng)基可以避免小顆粒乳液在培養(yǎng)基中分布不均的問題，有利于提高乳液向秀麗隱桿線蟲遞送的效率。選擇平均粒徑為 200 nm 的蛋白乳液，研究培養(yǎng)基中不同油脂濃度對秀麗隱桿線蟲油脂遞送效率的影響，結(jié)果由圖 2-3 所示。培養(yǎng)基中油脂濃度分別為 0.01 mmol/L、0mmol/L、1mmol/L 和 10mmol/L，線蟲體內(nèi)積累的辛酸分別是 0.42%、4.36%、9.50%和12.88%，癸酸分別是 0.47%、8.63%、20.38%和 24.82%。結(jié)果表明培養(yǎng)基中油脂濃度在0.01-10 mmol/L 范圍時，線蟲油脂遞送量與油脂濃度呈正相關(guān)。為了觀察秀麗隱桿線蟲攝入蛋白乳液的過程，本實驗用尼羅紅染料標記蛋白乳液中的油脂，并通過熒光倒置顯微鏡對秀麗隱桿線蟲進行表征，結(jié)果如圖 2-4 所示。結(jié)果顯示當?shù)鞍兹橐毫椒秶鸀?200-400 nm 時，蛋白乳液的粒徑越小線蟲體內(nèi)的熒光強度越高。當培養(yǎng)基中的油脂濃度在 0.01-10mmol/L 范圍內(nèi)時，培養(yǎng)中油脂的含量越高，蛋白乳液向秀麗隱桿線蟲遞送油脂的效率越高。
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本文編號：2864282