蓮子具有清熱降火、降血壓、促進睡眠之功效�，F(xiàn)代流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,攝入富含酚類物質(zhì)的食物對預(yù)防心腦血管疾病、高脂血癥、動脈粥樣硬化、糖尿病等慢性疾病具有重要作用。因此,本研究以蓮子為原料,通過堿法提取蓮子中結(jié)合酚類物質(zhì)(lotus seed bound phenolics,LBP),響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝,并對其體外抗氧化活性和酚類成分進行分析。此外,通過分析LBP對3T3-L1脂肪細胞和高脂飲食小鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)基因和蛋白表達水平變化,以及對小鼠腸道菌群多樣性的影響,探討其調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的分子機制。其研究結(jié)果對揭示蓮子的健康效應(yīng)機制,引導(dǎo)合理膳食具有重要意義。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)以建寧蓮子為原料,研究溶劑酸堿、堿濃度、料液比和提取時間對蓮子結(jié)合酚含量的影響。并采用中心組合設(shè)計優(yōu)化結(jié)合酚的提取工藝,結(jié)果表明,鮮蓮結(jié)合酚最佳提取工藝條件為NaOH溶液濃度2.8 mol/L、料液比1:25(g/mL)、水解時間3.7 h,在此條件下,實測結(jié)合酚得率達(8.483±0.063)mg/g(以鮮蓮干質(zhì)量計)。(2)以氯仿,乙酸乙酯,正丁醇為萃取劑分離得到不同極性部位結(jié)合酚,比較不同部位結(jié)合酚含量以及抗氧化性能,并對結(jié)合酚類成分進行分析。結(jié)果表明蓮子正丁醇相的結(jié)合酚含量最高,而正丁醇、乙酸乙酯相具有較強的總抗氧化能力以及清除DPPH自由基和羥自由基能力,且在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi),結(jié)合酚濃度與其抗氧化活性呈明顯的線性關(guān)系。此外,高效液相色譜(HPLC)結(jié)果表明,正丁醇相富含原兒茶酸(0.42±0.12mg/g),咖啡酸(0.23±0.08mg/g),鞣花酸(0.15±0.06mg/g)三種酚類成分。綜上所述,蓮子正丁醇相富含結(jié)合酚類成分,且具有較強的抗氧化能力。(3)以3T3-L1細胞為模型,研究LBP的體外抗肥胖作用。結(jié)果表明LBP的濃度在100μg/mL以內(nèi),對3T3-L1細胞不具有毒性。在此濃度范圍內(nèi),細胞內(nèi)脂質(zhì)含量隨處理劑量的增加而顯著降低。此外,LBP(50和100μg/mL)處理可激活腺苷一磷酸激活蛋白激酶(AMPK),同時下調(diào)脂肪生成相關(guān)基因(PPARγ,C/EBPα,SREBP-1c,LPL,FAS,aP2)和上調(diào)脂解基因脂聯(lián)素(adiponectin)的表達。因此,LBP可能通過激活A(yù)MPK信號通路從而實現(xiàn)抑制脂肪生成的作用。(4)以高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠為模型,研究LBP的體內(nèi)抗肥胖作用。全部小鼠適應(yīng)一周后,被分為4個組:正常飲食組(ND)、高脂飲食組(HFD)、高脂飲食+LBP組(HFD+LBP)和高脂飲食+綠原酸組(HFD+CGA,陽性對照)。HFD+LBP和HFD+CGA組小鼠分別按照400 mg/kg·d和150 mg/kg·d劑量灌胃,實驗周期為6周。實驗結(jié)束后,取血漿、肝臟、附睪脂肪用于后續(xù)分析。結(jié)果表明LBP可減少高脂飲食誘導(dǎo)小鼠血漿的脂質(zhì)水平,抑制脂肪組織肥大和肝臟內(nèi)脂質(zhì)沉積。此外,相較于HFD組,LBP處理可促進高脂膳食誘導(dǎo)肥胖小鼠脂肪組織AMPK磷酸化,同時下調(diào)與脂肪生成相關(guān)基因PPARγ,C/EBPα,SREBP-1c,LPL,FAS,aP2和GPR43的mRNA表達量和上調(diào)adiponectin表達。綜上,LBP產(chǎn)生抗肥胖作用的機制可能與其激活了AMPK信號通路有關(guān)。(5)進一步研究LBP的抗肥胖機理,我們對不同飲食組小鼠的腸道微生物組成進行了高通量測序分析。結(jié)果表明,相較于HFD組,ND組的Firmicutes/Bacteroidetes比值顯著下降,而LBP處理可適當(dāng)?shù)販p少Firmicutes和Bacteroidetes菌門的數(shù)量,并促進有益菌科Verrucomicrobiacea和它的屬Akkermansia的增長和抑制肥胖相關(guān)菌科Desulfovibrionaceaee的數(shù)量。綜上所述,LBP可能有益地調(diào)節(jié)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠腸道微生物群的組成。
【學(xué)位單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS201.4
【部分圖文】：

合酚對 3T3-L1 細胞和肥胖小鼠脂質(zhì)代謝的影響及作用機制的研第一章 文獻綜述研究進展要產(chǎn)地蓮科水生草本植物蓮的成熟種子，形狀大多是橢圓形或球般長度 1.2-1.8cm，直徑 0.8-1.4cm，重量 1.1-1.4g（圖 1-有上千年的歷史了，我國大部分地區(qū)均有出產(chǎn)，以湖南湘蓮、浙江衢蓮為上品。

合酚與纖維素分子共價鍵結(jié)合[26]：(a)4-羥基苯甲酸與酯鍵(b)兒茶素與柚皮素與碳碳單鍵Representative covalent bonds found in insoluble-bound phenolics; (a) esterxy benzoic acid (b) ether bond of catechin and (c) carbon-carbon bond of naattached to cellulose molecule酚提取方法作為一種最常見的結(jié)合酚提取方法，可有效地破壞多酚與細胞和酯鍵，釋放出結(jié)合酚，其中以 NaOH 法最為常見，KOH 為報道。堿濃度、時間、溫度以及輔助處理方式（微波，超聲波提取效率的主要因素。劉天行等[34]以堿濃度（1~6mol/L）和為單因素提取小米中結(jié)合態(tài)多酚，結(jié)果表明結(jié)合酚的含量在 l/L，時間為 4h 達到到最大值，若繼續(xù)增加提取時間，多酚物

桂酰酯酶；B:鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)用載體；C:乳糖酶-根皮苷水解酶；D:β-葡萄E:酯酶和木聚糖酶。圖 1-3 酚類化合物在腸道的主要吸收途徑Fig. 1-3 Absorption pathways of phenolic compounds in the gastrointestinal tra酚在脂肪生成和肥胖發(fā)生中的作用多酚與脂肪組織肪組織具有不同的顏色、形態(tài)、代謝功能、生化特性和基因表達模包括人類和小鼠）具有兩種截然不同的脂肪，即白色脂肪和棕色肪廣泛分布在體內(nèi)皮下組織和內(nèi)臟周圍，主要功能是保護器官、負熱能以備不時之需，若過多也可能對健康有負面影響，從而引起胰綜合征和肥胖病等疾病的發(fā)生。棕色脂肪主要位于人體頸部以及燒儲存為脂肪的能量，同時消耗葡萄糖并燃燒脂肪將其轉(zhuǎn)變?yōu)闊?
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本文編號：2860582