嗜熱鏈球菌是一種多功能益生菌,廣泛應(yīng)用于日常生活中。嗜熱鏈球菌生長條件非�？量�,需要外界環(huán)境提供一些必需氨基酸、維生素等生長因子,這些因子一旦缺乏便會(huì)限制其生長。因此,尋找合理有效的氮源促進(jìn)嗜熱鏈球菌高密度生長一直是我國研究的熱點(diǎn)。草魚生長迅速,飼料來源廣,營養(yǎng)價(jià)值豐富,目前,我國對草魚的加工以傳統(tǒng)方式為主,集中在生鮮銷售、魚粉飼料等初加工產(chǎn)品,產(chǎn)品附加值較低。在水產(chǎn)品加工過程中,產(chǎn)生了大量的副產(chǎn)物,其中含有蛋白質(zhì)含量較高的魚皮。如果這些副產(chǎn)物不能夠有效利用,不僅會(huì)造成浪費(fèi),還會(huì)造成環(huán)境污染。草魚皮中蛋白質(zhì)含量比魚體的其他部位要高許多,如果從草魚皮加工副產(chǎn)物中提取膠原蛋白肽,不僅可以得到多肽、氨基酸,而且價(jià)格低廉,成本低。本課題以水產(chǎn)品加工副產(chǎn)物草魚皮為主要研究對象,采用生物酶技術(shù)酶解草魚皮蛋白制備多肽,分別以水解度和促進(jìn)嗜熱鏈球菌增殖為指標(biāo),對酶解條件進(jìn)行工藝優(yōu)化,對比二者之間關(guān)系,選擇出最佳酶解工藝,在此基礎(chǔ)上對酶解液進(jìn)行大孔樹脂脫腥脫色處理和體外抗氧化活性分析。主要研究結(jié)果如下:1.以水解度為指標(biāo),研究不同蛋白酶(胃蛋白酶、風(fēng)味中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性酶)對草魚皮水解度的影響,并篩選水解度最高的蛋白酶酶。結(jié)果顯示,風(fēng)味中性蛋白酶水解度最高,因此選擇風(fēng)味中性蛋白酶進(jìn)行后期試驗(yàn)。選擇酶解時(shí)間、料水比和加酶量進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn),并在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行Box-Benhnken響應(yīng)面組合設(shè)計(jì)試驗(yàn),結(jié)果表明以水解度為指標(biāo)的草魚皮酶解工藝為:酶解時(shí)間6.87 h,料水比1:9.60(w/v),風(fēng)味中性蛋白酶加酶量5.51%。2.風(fēng)味酶酶解產(chǎn)物游離氨基酸含有促進(jìn)嗜熱鏈球菌生長的必需氨基酸,可以進(jìn)行試驗(yàn)研究。選擇酶解時(shí)間、料水比和加酶量進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn),在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行Box-Benhnken響應(yīng)面組合設(shè)計(jì)試驗(yàn),結(jié)果表明促進(jìn)嗜熱鏈球菌增殖效果最佳酶解工藝為:酶解時(shí)間4.13 h,料水比1:9.89,風(fēng)味中性蛋白酶加酶量3.1%;以水解度為指標(biāo)的最佳酶解條件與以促進(jìn)嗜熱鏈球菌為指標(biāo)的酶解條件沒有關(guān)系,考慮到本課題研究草魚皮酶解產(chǎn)物對益生菌增殖效果,選擇促進(jìn)嗜熱鏈球菌增殖的酶解工藝制備多肽進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)研究。3.大孔樹脂純化處理工藝的研究:以大孔樹脂類型的篩選、單因素等試驗(yàn)和正交試驗(yàn),得到DA201-C型大孔樹脂對草魚皮多肽的脫腥脫色效果最好;其他條件相同,當(dāng)溫度介于15℃-35℃,樹脂添加量介于2.5%-7.5%,pH介于6-8,處理時(shí)間介于1.0 h-1.5 h,脫腥脫色效果最好。正交試驗(yàn)結(jié)果顯示:DA201-C型大孔樹脂脫腥脫色最佳工藝草魚皮多肽中游離氨基酸損失率高于總氨基酸損失率,游離氨基酸中苦味氨基酸損失較多;GC-MS結(jié)果表明揮發(fā)性物質(zhì)的種類減少了12種,醛類、醇類、酮類、芳香類和含氮類物質(zhì)含量有些下降,酯類和烴類及其他物質(zhì)的含量均增加。脫腥脫色前后的草魚皮多肽對嗜熱鏈球菌增殖效果無顯著性差異。4.根據(jù)分子量大小將最佳條件下得到的多肽分為4段:GFSPHⅠ(10000 Da);GFSPHⅡ(5000～10000 Da);GFSPHⅢ(3000～5000 Da);GFSPHⅣ(3000Da),(未分段GFSPH)研究不同分子量的肽段對嗜熱鏈球菌增殖作用和抗氧化性。不同分子量草魚皮多肽對嗜熱鏈球菌增殖效果結(jié)果顯示,分子量3000 Da的草魚皮多肽對嗜熱鏈球菌增值效果最顯著;體外抗氧化試驗(yàn)結(jié)果顯示,草魚皮多肽具有較強(qiáng)的抗氧化能力,GFSPHⅣ對DPPH自由基清除的IC_(50)值為5.99 mg/mL,對羥自由基自由基清除的IC_(50)值為10.44 mg/mL,GFSPHⅣ對自由基清除能力大小依次為:DPPH羥自由基超氧陰離子。
【學(xué)位單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS254.9
【部分圖文】：

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文作過程中，盡量減少操作步驟，本研究中原材料沒有進(jìn)行脫脂解后 4 ℃離心過濾操作除去大多數(shù)脂肪�；盍�(biāo)準(zhǔn)曲驗(yàn)是以測定產(chǎn)物形成的量來表示蛋白酶的活力，根據(jù) Folin-酚產(chǎn)生的酪氨酸生成藍(lán)色物，在 660nm 處的吸光值來測定的。圖 2-1。酪氨酸濃度與其吸光度的線性關(guān)系為：y=0.0074x，R關(guān)系較好，可以用來測定酪胺酸濃度。

圖 2-1 酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2-1 Standard curve of tyrosine曲線可得，胃蛋白酶活力為 39830U，風(fēng)味中性蛋白酶 1 114041U，胰蛋白酶 44590 U，堿性酶為 84353U�；緲�(biāo)準(zhǔn)值，可以用于實(shí)驗(yàn)。白酶對草魚皮的酶解能力

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文從圖 2-2 可以看出，風(fēng)味中性蛋白酶酶水解度最高，這表明在每種酶的最驗(yàn)條件下風(fēng)味中性蛋白酶水解的最徹底，其次是木瓜蛋白酶、堿性酶和胰蛋，胃蛋白酶的水解度最低。風(fēng)味蛋白酶天然安全，反應(yīng)條件溫和、酶解產(chǎn)物高，可應(yīng)用于各種動(dòng)植物蛋白的酶解，后期風(fēng)味優(yōu)化，去除苦味，改善口感用風(fēng)味中性蛋白酶可制取良好酶解產(chǎn)物，提高產(chǎn)品質(zhì)量，降低成本。因此，風(fēng)味中性蛋白酶進(jìn)行后期試驗(yàn)。.3.4 風(fēng)味中性蛋白酶單因素試驗(yàn)結(jié)果.3.4.1 料水比對水解度的影響
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2843121