【摘要】：隨著我國城市化和工業(yè)化的發(fā)展,水生系統(tǒng)的重金屬污染已經(jīng)成為全球關(guān)注的一個(gè)熱點(diǎn)問題,其中,重金屬鎘(Cd)被認(rèn)為是毒性最強(qiáng)的一種重金屬,是主要的水體重金屬污染物之一。鯽魚是我國淡水養(yǎng)殖的一個(gè)優(yōu)良品種,是人類的食物來源之一,并具有極強(qiáng)的Cd富集能力,因此鯽魚的重金屬污染已成為影響魚類食品安全性的一個(gè)重要因素。如何降低魚類的重金屬含量從而提高食品的安全性已經(jīng)成為食品領(lǐng)域一個(gè)迫切需要解決的問題。對于消除鯽魚體內(nèi)Cd等有害重金屬殘留的危害,保證食品的安全,非常有效果的方式是從源頭上降低Cd等有害重金屬的含量。因此可以通過改善機(jī)體的自衛(wèi)機(jī)制,抑制Cd在鯽魚體內(nèi)的積累,減少鯽魚體內(nèi)Cd的污染。水生生物擁有一種多型異源物質(zhì)抗性機(jī)制(Multi-xenobiotic resistance,MXR),類似于腫瘤細(xì)胞多藥耐藥抗性機(jī)制(Multi-drug resistance,MDR),該系統(tǒng)能夠?qū)⒍喾N內(nèi)源和外源有害物質(zhì)泵出細(xì)胞以保護(hù)細(xì)胞免受傷害。其中在重金屬抗性中起重要作用的是一跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,稱為P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),它可以直接將外來物質(zhì),包括Cd,從體內(nèi)泵出。目前對于P-gp在水生生物中的作用已有許多研究,但是對于其在鯽魚體內(nèi)耐受Cd中的作用罕有報(bào)道。因此,本論文的目的是研究P-gp是否在鯽魚耐受Cd的過程中發(fā)揮的作用。本論文的主要研究及結(jié)果如下:1重金屬Cd在鯽魚體內(nèi)的富集規(guī)律鯽魚暴露于Cd過程中,Cd能在肝臟和鰓中快速富集,對Cd有很強(qiáng)的蓄積性,且對Cd的富集能力為鰓肝臟。不同染Cd濃度和不同染Cd時(shí)間均對肝臟和鰓中Cd的富集量有顯著的影響(p0.05)。同一時(shí)間,隨著染Cd濃度的增加,Cd在肝臟和鰓中的富集量顯著升高(p0.05)。同一濃度,低劑量組,隨著時(shí)間的延長,肝臟和鰓中對Cd的累積量呈現(xiàn)一個(gè)先上升后下降的趨勢;中劑量組和高劑量組中,肝臟和鰓中Cd的含量隨時(shí)間的延長而升高。2 Cd累積與P-gp活性的關(guān)系通過外排法,測定Rho B的排出速率來考察不同作用下P-gp活性變化。結(jié)果顯示,P-gp在鯽魚的Cd累積中起著重要的作用,Cd的累積可以增強(qiáng)肝臟和鰓中P-gp活性,提高對Cd的轉(zhuǎn)運(yùn)能力,參與到鯽魚對Cd的耐受或抗性,對機(jī)體起到保護(hù)作用。不同染Cd濃度和染Cd時(shí)間均對鯽魚肝臟和鰓中P-gp活性有顯著影響(p0.05)。同一時(shí)間,隨著染Cd濃度增加,肝臟和鰓中P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)活性顯著升高(p0.05)。同一濃度,隨著時(shí)間的延長,肝臟和鰓中P-gp活性呈先上升后下降的趨勢。3添加P-gp抑制劑維拉帕米(Verapamil,Ver)Ver對P-gp活性影響在添加了66.7μmol/L的P-gp抑制劑Ver來作對照后,抑制了P-gp對Rho B的外排速率,抑制了P-gp的活性。表明Ver能夠有效抑制鯽魚肝臟和鰓中P-gp的活性,進(jìn)一步反映出P-gp在鯽魚耐受Cd中所發(fā)揮的作用。4重金屬Cd對鯽魚體內(nèi)P-gp在mRNA水平表達(dá)的影響通過熒光定量PCR的測定結(jié)果發(fā)現(xiàn),在Cd暴露的過程中對P-gp的mRNA表達(dá)產(chǎn)生了一定影響。Cd的累積可以上調(diào)鯽魚肝臟和鰓中P-gp的mRNA表達(dá),P-gp的mRNA表達(dá)量隨著體內(nèi)積累的Cd濃度升高而升高,低劑量組肝臟組織內(nèi)P-gp的mRNA表達(dá)在24 h與對照組無顯著性(p0.05),而鰓組織未呈現(xiàn)出相似的規(guī)律。同一時(shí)間,隨著染Cd濃度增加,肝臟和鰓中P-gp的mRNA表達(dá)升高。同一濃度,隨著時(shí)間的延長,肝臟和鰓中P-gp的mRNA表達(dá)呈先上升后下降的趨勢。P-gp的mRNA表達(dá)變化與活性變化呈現(xiàn)相似的時(shí)間-效應(yīng)和劑量-效應(yīng)模式。5重金屬Cd對鯽魚體內(nèi)P-gp在蛋白水平表達(dá)的影響通過免疫組織化學(xué)的測定結(jié)果發(fā)現(xiàn),在Cd暴露的過程中對P-gp的蛋白表達(dá)產(chǎn)生了一定的影響。Cd的累積可以誘導(dǎo)鯽魚肝臟和鰓中P-gp的蛋白表達(dá)。肝臟組織在同一時(shí)間內(nèi),P-gp的蛋白表達(dá)量隨著體內(nèi)積累的Cd濃度增加而增加,同一濃度,暴露于同一劑量濃度Cd,隨著染毒時(shí)間的延長,P-gp的蛋白表達(dá)呈先升高后下降的規(guī)律,分別在72 h達(dá)到最大,之后,呈下降趨勢。對于鰓組織沒有發(fā)現(xiàn)相似的規(guī)律,但從整體上看,Cd上調(diào)了鰓組織內(nèi)P-gp在蛋白水平上的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TS254.1
【圖文】：

16圖 2-2 鯽魚肝臟中 Cd 富集量Fig. 2-2 Accumulation of Cd in the liver of the crucian carp中同一行相同字母表示同一時(shí)間點(diǎn)不同濃度間差異不顯著（p>0.05），不同字母表示差異顯著（te:The same letter of the same line in the figure shows no significant difference between the diffncentrations at the same time.（p>0.05）. Different letters shows significant difference（p<0.0實(shí)驗(yàn)期間，在第 24、48、72 和 96 h 每組取 3 尾鯽魚進(jìn)行肝臟中 Cd計(jì)算肝臟在不同濃度下對 Cd 的富集規(guī)律，其趨勢圖見圖 2-2。本實(shí)驗(yàn)，不同染 Cd 濃度和不同染 Cd 時(shí)間均對肝臟中 Cd 的富集有顯著<0.05）。在同一時(shí)間內(nèi)，隨著染 Cd 濃度的增加，肝臟中 Cd 的富集一多（p<0.05）。在 24 h 時(shí)，低、中、高劑量濃度的 Cd 在肝臟中的富集

圖 2-4 鯽魚鰓中 Cd 富集量Fig. 2-4 Accumulation of Cd in the gill of the crucian carp同一行相同字母表示同一時(shí)間點(diǎn)不同濃度間差異不顯著（p>0.05），不同字母表示差異顯著（phe same letter of the same line in the figure shows no significant difference between the differntrations at the same time.（p>0.05）. Different letters shows significant difference（p<0.05）魚鰓對 Cd 的富集規(guī)律，其趨勢圖見圖 2-4。結(jié)果表明，不同染 Cd 濃 Cd 時(shí)間均對 Cd 在鯽魚鰓中的富集有顯著的影響（p<0.05）。在同隨著染 Cd 濃度的增加，鰓中 Cd 的富集量一直呈上升趨勢，且與對異均顯著（p<0.05）。在 24 h 時(shí)，低、中、高劑量濃度的 Cd 在鰓中別增長了 90 %、92 %和 95 %，且與對照組比差異均顯著（p<0.05）能在鰓內(nèi)快速富集。低劑量組，在 48 h，鯽魚鰓中對 Cd 的富集量達(dá)達(dá)到了 2.2064 mg/kg，之后呈現(xiàn)下降趨勢，說明在暴露于低劑量濃度魚自身的防護(hù)功能具有十分重要的作用，從而防止外來有害物質(zhì)對機(jī)中劑量組和高劑量組，96 h 內(nèi)，隨著作用時(shí)間的延長，Cd 的含量一

重金屬鎘對鯽魚體內(nèi) P-糖蛋白動(dòng)力學(xué)及表達(dá)影響的研究圖 2-5 Rho B 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 2-5 Standard curve of Rho B 重金屬 Cd 對鯽魚肝臟組織 P-gp 活性的影響y = 121.09x + 4734.9R2= 0.994050001000015000200002500030000350000 50 100 150 200 250熒光值Rho B濃度 （pmol/L）

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10 董憲U

本文編號(hào)：2805265