【摘要】：隨著人民生活質(zhì)量的提高,人們對(duì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的追求也越來(lái)越高,食品安全質(zhì)量問(wèn)題越來(lái)越成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。櫻桃作為第三代水果品種之一,具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功能性成分,具有降低糖尿病、抑制代謝紊亂、抗氧化、抗炎、抗癌等功效。因?yàn)闄烟椅兜栗r美,口感獨(dú)特,價(jià)值高昂,為了獲得更多利潤(rùn),在櫻桃果汁等產(chǎn)品中摻假、制假成為可能,因此,快速準(zhǔn)確的檢測(cè)果汁中櫻桃成分可為櫻桃及其制品的產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控提供技術(shù)支持。(1)櫻桃物種特異性序列的查找。通過(guò)NCBI獲得櫻桃、草莓、獼猴桃等19種常見(jiàn)水果共41套基因組。利用Perl語(yǔ)言進(jìn)行BLAST序列比對(duì),最后挑選出了9對(duì)對(duì)櫻桃特異性強(qiáng)擴(kuò)增效果好的引物,其擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序后確定了櫻桃基因組中特異性區(qū)段的DNA序列。(2)櫻桃物種鑒別特異性PCR方法的建立。以櫻桃、草莓、獼猴桃等19種常見(jiàn)水果基因組DNA為模板,對(duì)上述9對(duì)引物進(jìn)行了特異性檢測(cè),PCR體系和退化溫度的優(yōu)化以及靈敏度的測(cè)定。結(jié)果表明,在9對(duì)引物中,che36-F/R引物對(duì)擴(kuò)增效果和特異性最好。在引物濃度為0.4μmol/L、退火溫度為58℃時(shí),PCR鑒別法的靈敏度最好,可達(dá)0.5%。實(shí)際樣品測(cè)試表明此方法可用于混合鮮榨果汁和非鮮榨果汁中櫻桃成分定性鑒別。(3)櫻桃物種鑒別特異性實(shí)時(shí)熒光PCR方法的建立。根據(jù)櫻桃基因組DNA特異性區(qū)段che36序列設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物和探針。qPCR體系和程序優(yōu)化后,che36-1-QF/QR/QP在引物和探針濃度均為0.5μmol/L時(shí),靈敏度可達(dá)0.1%。最優(yōu)擴(kuò)增條件下,制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為y=-3.356x+31.062,R~2=0.998,擴(kuò)增效率為98.545%,Ct值與櫻桃基因組DNA模板量之間具有y=-1.457ln(x)+29.367的關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R~2為0.9985。通過(guò)樣品的測(cè)試證明此方法可用于定性鑒別混合鮮榨果汁、非濃縮果汁中櫻桃成分,并能測(cè)定櫻桃基因組DNA的含量。(4)櫻桃物種鑒別特異性數(shù)字PCR方法的建立。ddPCR反應(yīng)體系和程序優(yōu)化后,che36-1-QF/QR/QP在引物濃度為0.5μmol/L、探針濃度為0.2μmol/L、退火溫度為56.7℃時(shí),ddPCR擴(kuò)增效果最好,線(xiàn)性定量范圍下檢測(cè)限為0.24ng櫻桃基因組DNA。特異性區(qū)段che36的拷貝數(shù)和DNA模板量之間具有y=7.4093x+1.2482的線(xiàn)性關(guān)系,且相關(guān)系數(shù)R~2=1。通過(guò)樣品的測(cè)試證明此方法可用于定性鑒別混合鮮榨果汁、非濃縮果汁和濃縮果汁中櫻桃成分,并能得到櫻桃特異性片段che36拷貝數(shù)。本研究建立了櫻桃物種特異性鑒定方法,為果汁中櫻桃源性成分的鑒定提供了技術(shù)支撐,同時(shí)為食品質(zhì)量安全控制提供了試驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：TS255.44
【圖文】：

10μmol/L F 1.0 2 40 s/95℃10μmol/L R 1.0 3 30 s/58℃40DNA 模板（25ng/μL） 2.0 4 40 s/72℃ddH2O 8.5 5 10min/72℃ 1總體積 25 6 4℃ ∞2.2 結(jié)果與分析2.2.1 生物信息學(xué)分析結(jié)果通過(guò) Perl 語(yǔ)言分析最終得到了 28800 個(gè)櫻桃物種特異性條帶結(jié)果。根據(jù)特定百分比（Specific Percent），此值越高說(shuō)明比對(duì)的序列相似性越低。根據(jù)特定百分比從 28800中值篩選出最優(yōu)的 40 條 300~700bp 之間的片段，將這 40 條序列在 NCBI 上 BLAST（如圖 1~17），篩選出特異性較強(qiáng)的 17 對(duì)序列。

2.2.1 生物信息學(xué)分析結(jié)果通過(guò) Perl 語(yǔ)言分析最終得到了 28800 個(gè)櫻桃物種特異性條帶結(jié)果。根據(jù)特定百分比（Specific Percent），此值越高說(shuō)明比對(duì)的序列相似性越低。根據(jù)特定百分比從 28800中值篩選出最優(yōu)的 40 條 300~700bp 之間的片段，將這 40 條序列在 NCBI 上 BLAST（如圖 1~17），篩選出特異性較強(qiáng)的 17 對(duì)序列。圖 1 che01 擴(kuò)增序列 BLAST 比對(duì)結(jié)果Figure 1 BLAST result of che01 amplification sequence

che07擴(kuò)增序列BLAST比對(duì)結(jié)果

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃銀強(qiáng);;余姚市梁弄鎮(zhèn)櫻桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展的對(duì)策與思考[J];寧波農(nóng)業(yè)科技;2013年02期

2 孫玉剛;魏國(guó)芹;付全娟;侯森;楊興華;;櫻桃生產(chǎn)現(xiàn)狀與發(fā)展策略[J];煙臺(tái)果樹(shù);2018年01期

3 童彤;;智利:蘋(píng)果基因改良,助新品種研發(fā)[J];中國(guó)果業(yè)信息;2016年11期

4 趙玉山;;山西:絳縣全力打造“全國(guó)櫻桃之鄉(xiāng)”[J];中國(guó)果業(yè)信息;2017年06期

5 王茂思;張般般;秦艷筠;楊靜慧;龔無(wú)缺;張超;;低溫冷藏中6個(gè)櫻桃品種的品質(zhì)變化[J];天津農(nóng)林科技;2016年06期

6 ;陜西兩個(gè)酸櫻桃品種通過(guò)審定[J];西北園藝(果樹(shù));2017年05期

7 桂毓;楊靜慧;劉艷軍;史滟n

本文編號(hào)：2796373