【摘要】：共軛亞油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是亞油酸的異構(gòu)體,主要存在于反芻動物的肉及乳制品中,是人類膳食中CLA的主要來源。共軛亞油酸具有抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化、減少脂肪堆積、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)生長等功能,隨著共軛亞油酸研究的越來越深入,現(xiàn)已逐漸應(yīng)用于人類的營養(yǎng)與保健中。本實(shí)驗(yàn)主要研究內(nèi)容如下:(1)采用冷凍分離法聯(lián)合尿素包合法提取黃油中共軛亞油酸。首先冷凍結(jié)晶法對混合脂肪酸進(jìn)行冷凍結(jié)晶分離,研究不同有機(jī)溶劑、混合脂肪酸和溶劑比、冷凍時(shí)間、冷凍溫度四個單因素對CLA純度和得率的影響。經(jīng)液相檢測得出最佳提取條件:混合脂肪酸與無水乙醇的比例為1:12,處理時(shí)間9 h,處理溫度為-20℃,得到CLA純度為8.49%,得率為85.62%。在冷凍結(jié)晶的基礎(chǔ)上進(jìn)一步采用尿素包合的方法純化CLA。研究回流時(shí)間、包合時(shí)間、包合溫度、混合脂肪酸:尿素:無水乙醇四個單因素對CLA純度和得率的影響,結(jié)果表明,回流時(shí)間、包合時(shí)間對CLA的純度和得率影響均較小,包合溫度、尿素/無水乙醇、混合脂肪酸/尿素影響較大,然后選擇對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響顯著的包合溫度、尿素/無水乙醇、混合脂肪酸/尿素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化,得到最佳包合條件:包合溫度21.70℃,回流時(shí)間15 min,包合時(shí)間3 h,尿素/無水乙醇為0.31,混合脂肪酸/尿素為0.37,在該條件下進(jìn)行尿素包合,得到的CLA純度平均值為22.55%,得率平均值為81.57%。(2)通過多次灌胃二甲基苯并蒽(7,12-dimethylbenzanthraene,DMBA)的方法成功建立小鼠乳腺癌模型,小鼠成瘤穩(wěn)定,特異性好。模型組和紫杉醇組出現(xiàn)腫瘤,CLA組、LA組、空白組均未發(fā)現(xiàn)腫瘤。HE染色觀察不同處理后小鼠各器官的變化以及腫瘤組織的切片觀察,結(jié)果表明,DMBA處理會引起肝臟、腎臟、脾臟的損傷,腫瘤未見肺部以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,各組織病變趨勢排序如下:肝臟:模型組紫杉醇組LA組空白組、CLA組。肺:紫杉醇組模型組LA組CLA組、空白組。腎臟:模型組紫杉醇組、CLA組、LA組空白組。脾臟:模型組紫杉醇組、LA組CLA組空白組。其中,紫杉醇組對肺的損傷較大,本身紫杉醇具有一定的毒性,臨床上常配合其他藥物一起使用以減少紫杉醇副作用。腫瘤組織HE染色結(jié)果表明腫瘤處于癌前病變時(shí)期,腫瘤細(xì)胞生長旺盛時(shí)期;相對于模型組,紫杉醇組向周圍組織浸潤程度更低。利用免疫組織化學(xué)方法檢測腫瘤組織Ki67、P53、PR、VEGF的表達(dá),結(jié)果表明,Ki67在模型組有較高的表達(dá),與紫杉醇組相比有顯著性差異;P53在模型組和紫杉醇組表達(dá)量均很高;PR在模型組和紫杉醇組表達(dá)量均較低;VEGF在模型組和紫杉醇組表達(dá)也較低,但兩組相比有極顯著性差異。(3)共軛亞油酸抗癌機(jī)理的初步探究。取各組小鼠外周血進(jìn)行生化指標(biāo)檢測,結(jié)果表明,各組小鼠白蛋白偏低,但無顯著性差異,各組小鼠總蛋白含量基本在正常范圍內(nèi)。其中,模型組中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量很高,與其余各組均有顯著性差異(p0.05),該指標(biāo)過高也是肝臟受損的表現(xiàn)之一,其余指標(biāo)均在正常范圍之內(nèi)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測小鼠血液中bcl-2、bax、p53 mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果表明,bcl-2和bax的mRNA相對表達(dá)量各組均無顯著性差異,模型組與CLA組相比,p53 mRNA相對表達(dá)量有顯著性差異,其mRNA的相對表達(dá)量分別為8.75±0.44,4.67±0.33,且CLA組與其它各組相比均有顯著性差異。這可能是因?yàn)镃LA通過抑制p53的表達(dá)起到抑癌作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS201.4
【圖文】：

圖 2.10 包合溫度與尿素/無水乙醇對 CLA 純度影響的響應(yīng)曲面及等高線圖Fig 2.10 Response surface plot and contour diagram for the interactive effects of adductiontemperature and urea/anhydrous ethanol on the purity of CLA

度值（average optical,AO 值），AO=IOD/AREA，AO 值越高。并利用每個實(shí)驗(yàn)組所對應(yīng)的陰性對照對圖像分析計(jì)分析l 2010 對數(shù)據(jù)分析作圖，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差9.0 統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-w05 差異有顯著性意義，P < 0.01 差異有極顯著性意義。長情況老鼠

圖 3.3 各組小鼠肝臟Fig 3.3 Liver tissue of each group of mice注：從左向右依次為模型組、CLA 組、LA 組、紫杉醇組、空白組從圖 3.3 可以看出，模型組和紫杉醇組肝臟表面有水泡，伴隨有肝囊腫肝囊腫是一種良性疾病，一般沒有明顯的癥狀，對動物體不會造成影響。其三組肝臟無明顯差異。除肝臟外，各組的肺、脾臟、腎臟肉眼觀察與空白組比無顯著差異。（2）A B

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本文編號：2788353