【摘要】：醋蛋液,由雞蛋和醋通過一定條件制成,是一種在中國已經(jīng)流傳很久的健康飲品。醋蛋液雖具有很多活性作用,但對于醋蛋液降血脂作用的研究甚少且機制不清楚。因此,本文主要測定了醋蛋液的營養(yǎng)組成,結合體內(nèi)和體外實驗探究了醋蛋液的降血脂作用及相關機制,同時模擬人體消化環(huán)境制備醋蛋液水解液,結合體外活性實驗從中分離、提取和制備新的活性肽,并通過質(zhì)譜鑒定、分子對接以及動力學等生物信息學方法分析肽與相關配體的作用機制,從而對醋蛋液降血脂物質(zhì)基礎及其機制進行分析,最后根據(jù)肽序列進行合成并測定其相關活性,以致在實驗和理論上充分證實降血脂作用,為進一步開發(fā)利用醋蛋液和三種新的活性肽提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)參考,具體研究結果如下:(1)醋蛋液的營養(yǎng)成分分析和活性研究。通過測定醋蛋液的一般營養(yǎng)成分、氨基酸組成和無機元素含量,發(fā)現(xiàn)醋蛋液含有豐富的游離氨基酸和無機元素,其中Glu,Ala,Lys,His和Val等氨基酸的含量高于原本的雞蛋。體外實驗得到醋蛋液相對于陽性對照消膽胺(膽汁酸結合能力100%)有43.21%的膽汁酸結合能力和一定的膽固醇膠束形成抑制能力,同時醋蛋液也展現(xiàn)出一定的抗氧化能力,且其表現(xiàn)出的降血脂活性和抗氧化能力與所含的游離氨基酸有關。通過灌胃方式干預治療高脂血癥小鼠,發(fā)現(xiàn)醋蛋液能夠有效降低高脂飲食引起的體重增加和脂肪重量,并降低小鼠的TG、TC、LDL-C、LDL-C/HDL-C、MDA水平和ALT、AST、FAS活性,提高HDL-C,SOD和GSH-PX水平,增加糞便膽汁酸排泄量,降低體內(nèi)膽固醇水平,減少肝臟脂滴積累和脂肪變性程度,抑制EAT中的脂質(zhì)積累,對小鼠肝臟有一定的保護作用,但對LPS活性和SAT中的脂質(zhì)積累無顯著的調(diào)節(jié)作用。(2)醋蛋液降血脂肽的分離鑒定和機制分析。以醋蛋液水解物降血脂活性(胰脂酶活性抑制能力、膽汁酸結合能力和膽固醇膠束形成抑制能力)為指標確定制備醋蛋液的最佳工藝條件為浸泡時間4天,溫度20℃,醋添加量160 mL。通過超濾分離和質(zhì)譜鑒定得到825個多肽,根據(jù)PeptideRanker和PepSite 2,先篩選出與胰脂酶結合p0.05的5個多肽,即ADHPFLFFIR、TPPFGGFR、SDDGYFFPMPVIR、VGFHCFPK和MYCCLPASWK,以及得到它們的結合位點,進一步通過分子對接和分子動力學分析篩選出3個活性肽,即ADHPFLFFIR,TPPFGGFR和MYCCLPASWK,識別出它們與配體的結合位點,發(fā)現(xiàn)這些肽與膽汁酸的強相互作用和其中大量疏水性氨基酸的存在有關,并從結合自由能和能量拆分結果分析發(fā)現(xiàn)氫鍵相互作用,范德華力和靜電相互作用也在肽的氨基酸殘基與膽汁酸結合的過程中起到重要作用。(3)醋蛋液降血脂肽的合成和活性測定。合成純度均在95%以上的三種肽,質(zhì)量分別為1262.60 Da,878.10 Da和1201.50 Da。通過BIOPEP數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)本實驗發(fā)現(xiàn)的肽均是未報道過的新肽,且其中含有一些以前在其他生物活性肽中報道過的活性結構域。并且通過體外降血脂和抗氧化實驗發(fā)現(xiàn)肽MYCCLPASWK具有最強的降血脂活性和抗氧化活性。但肽TPPFGGFR的ACE抑制活性(48.07%)優(yōu)于肽ADHPFLFFIR(39.67%)和肽MYCCLPASWK(33.30%)。
【學位授予單位】：合肥工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TS218
【圖文】：

16圖 2.1 醋蛋液的膽固醇膠束形成抑制能力Cholesterol micellar formation inhibitory ability of vinegar-

圖 2.2 醋蛋液的抗氧化能力Fig 2.2 Antioxidant activities of vinegar-egg in vitro2.3.7 醋蛋液對小鼠體重，肝臟，脾臟和脂肪組織重量的影響

（注：與 G2 組相比，*p < 0.05，**p < 0.01）圖 2.3 醋蛋液對高脂飲食模型小鼠血清相關指標的影響Fig 2.3 Effects of vinegar-egg on serum indicators in hyperlipidemic mice2.3.9 醋蛋液對小鼠氧化應激的影響

【參考文獻】

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本文編號：2777303