【摘要】：近年來,在我國因誤食毒蘑菇導(dǎo)致中毒的案例頻頻發(fā)生,常年不減,導(dǎo)致中毒死亡的主要原因是由含鵝膏肽類毒素的鵝膏菌屬Amanita的種類所引起的。含鵝膏肽類毒素的毒蘑菇除主要為鵝膏菌屬外,環(huán)柄菇屬Lepiota、盔孢傘屬Galerina的部分種類也含有。近幾年,誤食環(huán)柄菇屬中毒事件不斷增加,國際上關(guān)于環(huán)柄菇屬毒蘑菇的肽類毒素研究較少,而在國內(nèi)關(guān)于環(huán)柄菇屬的研究主要著重于物種的資源調(diào)查和分類,對于環(huán)柄菇屬蘑菇的環(huán)肽類毒素的研究從未報道過。近2年我們對環(huán)柄菇屬蘑菇引起的3例急性肝損害性中毒病例進(jìn)行了調(diào)查,證實其中2例是由肉褐鱗環(huán)柄菇Lepiota brunneoincarnata引起的,1例是由毒環(huán)柄菇L.venenata引起的。本文對肉褐鱗環(huán)柄菇Lepiota brunneoincarnata與毒環(huán)柄菇L.venenata的形態(tài)和分子物種鑒定、環(huán)肽毒素的檢測與鑒定2個方面進(jìn)行研究,現(xiàn)研究結(jié)果如下:1、形態(tài)和分子物種鑒定:肉褐鱗環(huán)柄菇Lepiota brunneoincarnata和毒環(huán)柄菇L.venenata宏觀形態(tài)上存在一定差異,肉褐鱗環(huán)柄菇菌蓋上的鱗片顏色呈現(xiàn)灰褐色至深棕色,鱗片多聚集在菌蓋中間凸起部位,菌柄頂端呈半淺棕色至粉紅棕色,且光滑,菌柄下端具有鱗片,菌環(huán)易脫落。而毒環(huán)柄菇菌蓋上的鱗片呈現(xiàn)褐色至棕褐色,鱗片較小,頂端細(xì)胞呈針披狀至近橢圓形,菌柄下端帶有棕色至紅棕色的鱗片,有菌環(huán)殘余。肉褐鱗環(huán)柄菇的擔(dān)孢子要比毒環(huán)柄菇的擔(dān)孢子大,肉褐鱗環(huán)柄菇的擔(dān)孢子形狀呈橢圓形到卵圓形,略帶杏仁狀。毒環(huán)柄菇的擔(dān)孢子呈橢圓形或圓柱形。2、基于ITS序列的分子鑒定:基于ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明肉褐鱗環(huán)柄菇與毒環(huán)柄菇不在同一分支上,毒環(huán)柄菇是一個新種。3、肉褐鱗環(huán)柄菇和毒環(huán)柄菇中的環(huán)肽類毒素檢測:通過超高壓液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測分析兩種環(huán)柄菇中的化學(xué)成分,表明肉褐鱗環(huán)柄菇中鑒定出了β-鵝膏毒肽(β-amanitin、β-AMA)、α-鵝膏毒肽(α-amanitin、α-AMA),三羥鵝膏毒肽(Amanin)、三羥鵝膏毒肽酰胺(Amaninamide),毒環(huán)柄菇中鑒定出了α-鵝膏毒肽、Amanin II和一個未知化合物,并未檢測等到β-鵝膏毒肽。肉褐鱗環(huán)柄菇和毒環(huán)柄菇中均未檢測出鬼筆毒肽和毒傘素。4、肉褐鱗環(huán)柄菇和毒環(huán)柄菇中兩種主要鵝膏毒肽的定量分析:通過建立兩種標(biāo)樣毒素(α-AMA、β-AMA)HPLC峰面積和進(jìn)樣量質(zhì)量的線性回歸方程,根據(jù)樣品中峰面積計算出肉褐鱗環(huán)柄菇和毒環(huán)柄菇中的α-鵝膏毒肽(α-AMA)和β-鵝膏毒肽(β-AMA)的含量,結(jié)果表明肉褐鱗環(huán)柄菇中總毒素的含量在1.300-2.661 mg/g干重,其中α-AMA濃度為0.732-1.728 mg/g干重,β-AMA濃度為0.568-0.933mg/g干重。在毒環(huán)柄菇中只檢測到α-AMA,且含量是1.969 mg/g干重。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS207.5
【圖文】：

驗材料中毒地點收集 4 個環(huán)柄菇樣品（肉褐鱗環(huán)柄菇 MHHNU 31026 MHHNU 31026 和毒環(huán)柄菇 MHHNU 31031）。樣本保存在湖南本館（MHHNU）。表 1 和圖 1 給出了樣品采集信息。表 2-1 本研究中分析的樣品列表物種編號 地理來源 ncarnata MHHNU 31026 Guangrao, Shandong ncarnata MHHNU 31030 Dalian, Liaoning ncarnata MHHNU 31032 Chendu, Sichuan MHHNU 31031 Jingzhou, Hubei

擔(dān)子呈棍棒狀，4 個孢子，很少 2 個孢子，由基部往上漸寬，無色。擔(dān)孢子6-8μm×4-5μm，橢圓形到卵圓形，略帶杏仁狀，表面光滑，無色。肉褐鱗環(huán)柄菇常生長在樹下，路邊等地。多生于夏季。毒環(huán)柄菇（L. venenata MHHNU 31031）：菌蓋中間部分凸起，四周扁平，凸起部分范圍較寬，菌蓋表面干燥時，呈現(xiàn)白色到奶白色，菌蓋中間凸起部分，密被褐色至棕褐色反卷的細(xì)小鱗片。菌蓋邊緣發(fā)白具小齒。菌褶附著在菌蓋下面，呈層狀，白色或奶油色，離生，密，不等長。菌柄呈圓柱狀，顏色呈現(xiàn)臟白色，菌柄下端覆蓋棕色至紅棕色鱗片，具有不完整的菌環(huán)，菌柄呈現(xiàn)空管。味道和氣味未知。擔(dān)子形狀呈棍棒狀，棍棒狀，4 個孢子，很少 2 個孢子，透明。擔(dān)孢子6-7μm×3-4μm，呈橢圓形或圓柱形，無色，透明，稍厚壁，光滑。毒環(huán)柄菇棲息地和分布：生長在闊葉樹林的土壤上，一般生長在夏季和秋季。

圖 3-1 基于 ITS 序列的最大似然分析產(chǎn)生的系統(tǒng)發(fā)育樹。在分支上報告最0％并且貝葉斯后驗概率超過 0.90。本論文中的序列以粗體表示。從 圖 中 可 以 看 出 ， L. venenata MHHNU 31031 （ MK09518nneoincarnata MHHNU 31026（MK095187）、MHHNU 31030（MKHNU 31032（MK095190）的支持率為 95%，足以證明 L. venena31（MK095189）是獨立于這三個樣品的，由此可以看出是個新enata MHHNU 31031（MK095189）與 L. sp. MFLU 09-0152（JN2率同樣為 95%，這兩個樣品也不屬于同一種。L. brunneoincarna26（MK095187）、MHHNU 31030（MK095188）、MHHNU 31032（MBrunneoincarnata xsd 08106（FJ481017、）L. brunneoincarnata HMU416302）、L. brunneoincarnata MCVE 1402（FJ998395）這六個樣 100%，足以證明這六個樣品是同一物種，都是屬于肉褐鱗環(huán)柄菇

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