【摘要】：雞胚蛋制品是人們喜食的傳統(tǒng)營養(yǎng)食品,但在雞胚孵化過程中,由于多種病原菌污染,給雞胚蛋及其制品安全帶來隱患。因此,了解雞胚蛋中病原菌的污染情況,建立快速檢測食源性病原菌的方法,對提高雞胚的健康存活率及孵化場的經(jīng)濟效益,保障雞胚蛋制品安全與公共衛(wèi)生具有重要意義。1、為探究雞胚蛋污染病原菌情況,采集91枚病死雞胚蛋,解剖胚體,從肝臟分離細菌、培養(yǎng),觀察菌落菌體形態(tài),提取分離株DNA,經(jīng)16S rDNA基因序列擴增和測序,在GenBank核酸數(shù)據(jù)庫中,與相近序列進行BLAST比對,對分離株進行鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),雞胚蛋外觀有裂痕或糞便污染物等,解剖發(fā)現(xiàn)皮下有膠凍狀物、肝臟呈土黃色、卵黃吸收不良。從雞胚蛋內(nèi)共分離鑒定出86株細菌,污染率為59.3%(54/91),混合污染率為42.6%(23/54)。鑒定出11種細菌,其中大腸桿菌占比為37.2%(32/86)、糞腸球菌為26.7%(23/86)、志賀氏菌為9.3%(8/86)、陰溝腸桿菌為5.8%(5/86)、博得特氏菌為4.7%(4/86)、沙門氏菌為4.7%(4/86)、金黃色葡萄球菌為3.5%(3/86)、鮑氏不動桿菌為3.5%(3/86)、Pseudomonas psychrotolerans為2.3%(2/86)、Massilia alkalitolerans為1.2%(1/86)和銅綠假單胞菌為1.2%(1/86)。這些表明病死雞胚的污染較高,涉及多種病原菌,其中以大腸桿菌和糞腸球菌為主,這為雞胚蛋制品的安全生產(chǎn)與監(jiān)測提供依據(jù)。2、為建立一種快速檢測雞胚蛋中大腸桿菌的方法,根據(jù)大腸桿菌fimC基因設(shè)計一對特異性引物,建立了熒光定量PCR方法。經(jīng)雞胚蛋樣品試驗,與沙門氏菌、志賀氏菌、奇異變形桿菌、綠膿桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、金黃色葡萄球菌等病原菌之間無交叉反應,特異性強;對大腸桿菌的最低檢測限為10~1CFU/mL,比普通PCR方法敏感約100倍,靈敏性好;重復性試驗變異系數(shù)小于2%,說明重復性好,該方法穩(wěn)定,可用于雞胚蛋制品中大腸桿菌的檢測。3、為建立一種快速檢測雞胚蛋中糞腸球菌的方法,根據(jù)糞腸球菌sodA基因設(shè)計一對特異性引物,建立了熒光定量PCR方法。經(jīng)雞胚蛋樣品試驗,與屎腸球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、奇異變形桿菌、綠膿桿菌等病原菌之間無交叉反應,特異性強;對糞腸球菌的最低檢測限為10~1CFU/mL,比普通PCR方法敏感約100倍,靈敏性好;重復性試驗變異系數(shù)小于2%,說明重復性好,該方法穩(wěn)定,可用于雞胚蛋制品中糞腸球菌的檢測。4、針對雞胚蛋主要污染大腸桿菌和糞腸球菌,建立了大腸桿菌和糞腸球菌雙重熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示,經(jīng)雞胚蛋樣品試驗,大腸桿菌產(chǎn)物的Tm值為85.6℃~86℃,糞腸球菌產(chǎn)物的Tm值為83.9℃~84℃,且與其他菌無交叉反應;大腸桿菌和糞腸球菌重復性試驗中變異系數(shù)較小,重復性好;對大腸桿菌和糞腸球菌的檢測限均為10~1 CFU/mL。說明該雙重熒光定量PCR方法敏感、特異、穩(wěn)定、可靠,一次反應同時檢測大腸桿菌和糞腸球菌,可用于雞胚蛋制品的檢測。
【學位授予單位】：河北工程大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TS253.7
【圖文】：

圖 2-1 雞胚蛋觀察癥狀Fig. 2-1 Observation symptoms of embryonated eggs解剖雞胚蛋癥狀有：皮下有膠凍樣物質(zhì)（圖 2-2A），肝臟呈土黃色（圖 2卵黃吸收不良（圖 2-2C），對照組肝臟呈紅褐色，表面光滑（圖 2-2D）。圖 2-2 雞胚蛋解剖癥狀Fig. 2-2 Anatomical symptoms of embryonated eggs2.3.2 分離株 PCR 擴增結(jié)果以分離株 DNA 為模板，通過 16S rDNA 的 PCR 擴增反應，經(jīng) 1.0%瓊脂ABCD

河北工程大學碩士學位論文呼吸微弱，雞鳴聲無力，有的死亡（圖 2-1C）。圖 2-1 雞胚蛋觀察癥狀Fig. 2-1 Observation symptoms of embryonated eggs解剖雞胚蛋癥狀有：皮下有膠凍樣物質(zhì)（圖 2-2A），肝臟呈土黃色（圖 2-2B），卵黃吸收不良（圖 2-2C），對照組肝臟呈紅褐色，表面光滑（圖 2-2D）。AABCBCD

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 臧廣賀;吳文斌;;再念孵化經(jīng) 十七 正常胚蛋和各種異常胚蛋的辨別[J];中國禽業(yè)導刊;2006年18期

2 李振鋼,王濤寬,李端仁,張麗敏;雞胚蛋血線方向與性別關(guān)系的統(tǒng)計研究[J];天津師大學報(自然科學版);2000年02期

3 周洵,吳成舜,張燕禹,劉彥,高彥祥;雞胚蛋營養(yǎng)效用研究[J];食品科學;1990年07期

4 高彥祥;雞胚蛋營養(yǎng)效價的研究[J];天津輕工業(yè)學院學報;1986年02期

5 錢萬英,余嗣明,施佩璜;雞胚蛋營養(yǎng)成分的測試[J];生理科學;1986年06期

6 錢萬英,沈業(yè)壽,施佩璜;雞胚蛋中氨基酸含量與孵育期的關(guān)系[J];安徽醫(yī)科大學學報;1988年01期

7 郭朝康;停電時間對不同日齡胚蛋的影響[J];中國家禽;1988年05期

8 黃向東,李振宇;高效液相色譜法測定雞胚蛋食品中的維生素E[J];色譜;1989年04期

9 H.J.Ougham;J.M.Peacock;陳周;;高溫對高粱出苗和胚蛋白合成的影響[J];國外農(nóng)學-雜糧作物;1989年01期

10 興龍;雞胚蛋能吃嗎?[J];飲食科學;2002年08期

相關(guān)會議論文 前10條

1 T.Moussa;陳偉;許佳;黃飛若;彭健;;胚蛋注射對鴨能量代謝、孵化率、蛋白質(zhì)狀況及生長性能的影響[A];第六次全國飼料營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2010年

2 趙敏孟;高天;張林;李蛟龍;呂朋安;余蘭林;高峰;周光宏;;胚蛋注射丙酮酸肌酸對肉雞孵化率、生長性能及能量儲備的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會第十二次動物營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2016年

3 陳偉;Tangara Moussa;許佳;彭健;;胚蛋注射二糖和丙氨酰-谷氨酰胺對肉鴨胚胎后期能量狀態(tài)和骨骼肌動員的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會第十一次全國動物營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2012年

4 陳偉;許佳;Tangara Moussa;胡小明;王榮;熊學林;彭健;;孵化后期胚蛋注射二糖和丙氨酰-谷氨酰胺二肽對肉鴨胚胎及出殼早期能量貯存狀態(tài)的影響[A];第六次全國飼料營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 陳偉;許佳;Tangara Moussa;胡小明;王榮;熊學林;彭健;;孵化后期胚蛋注射二糖和丙氨酰-谷氨酰胺二肽改變?nèi)怿喤咛ゼ俺鰵ぴ缙诠趋兰〉鞍踪|(zhì)代謝[A];第六次全國飼料營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2010年

6 高天;趙敏孟;張林;李蛟龍;余蘭林;高峰;周光宏;;胚蛋注射L-精氨酸對肉仔雞早期腸道發(fā)育機制的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會第十二次動物營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2016年

7 吳紅翔;劉泉剛;吳意繼;鄔乃霞;黃禮煜;;孵化期間雞胚蛋內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的研究[A];中國家禽業(yè)——機遇與挑戰(zhàn)——第十三次全國家禽學術(shù)討論會論文集[C];2007年

8 曾慶節(jié);王麗娜;束剛;王松波;朱曉彤;高萍;習欠云;張永亮;江青艷;;胚蛋注射CDCA對雞骨骼肌發(fā)育的影響[A];全國動物生理生化第七屆全國代表大會暨第十三次學術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2014年

9 馬友彪;張海軍;王晶;岳洪源;武書庚;齊廣海;;胚蛋給養(yǎng)吡咯喹啉醌二鈉對肉仔雞生長性能、胴體組成和血液生化指標的影響[A];第七屆中國飼料營養(yǎng)學術(shù)研討會論文集[C];2014年

10 劉梅英;陳偉;彭鵬;萬海峰;齊智利;彭健;;胚蛋注射在家禽營養(yǎng)中的研究進展[A];家禽營養(yǎng)與飼料科技進展——第二屆全國家禽營養(yǎng)與飼料科技研討會論文集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前8條

1 ;吃雞蛋的“學問”[N];人民政協(xié)報;2003年

2 姜師立;生物技術(shù)“激活”雞胚蛋[N];農(nóng)民日報;2003年

3 惠恩舉;大雁孵化及生產(chǎn)技術(shù)[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

4 鄭天龍;冬春孵鵝有新法[N];云南科技報;2008年

5 山東省章丘市畜牧局 馬玉勝;提高種蛋夏孵成績?nèi)c[N];河北科技報;2004年

6 張順東;鵝蛋的電器變溫孵化（下）[N];江蘇科技報;2003年

7 丹鳳縣科技局 李張鎖;怎樣掌握電孵機[N];陜西科技報;2001年

8 侯甲蘭;冬春孵鵝有新法(下)[N];河南科技報;2011年

相關(guān)博士學位論文 前5條

1 孫效名;胚蛋注射鋅、錳對肉種蛋胚胎發(fā)育、抗氧化性能和子代抗熱應激效應的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2018年

2 唐阿納·木杉;胚蛋注射對鴨能量代謝、孵化率、蛋白質(zhì)狀況及生長性能的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

3 段翔;孵化對雞蛋營養(yǎng)成分及生物活性組分的影響[D];江南大學;2015年

4 董信陽;鴿早期小腸發(fā)育及碳水化合物對其調(diào)控的研究[D];浙江大學;2013年

5 李德生;胚胎期外源性營養(yǎng)物質(zhì)介入對鵝胸肌及腸道發(fā)育規(guī)律的影響研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2016年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 洪琪;基于光譜技術(shù)的孵化早期雞胚蛋性別無損鑒別研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2019年

2 王亞蘭;雞雌雄胚蛋孵化期間甾體激素的變化及差異研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2019年

3 劉潔玉;冀南地區(qū)雞胚蛋有害菌的檢測[D];河北工程大學;2019年

4 胡玉舟;基于CNN與心跳信號的胚蛋成活性檢測方法研究[D];天津工業(yè)大學;2019年

5 劉華松;基于深度學習的毒株胚蛋圖像分割方法研究[D];天津工業(yè)大學;2019年

6 賈禮;鵪鶉胚蛋孵化過程中主要營養(yǎng)成分變化規(guī)律的研究與相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)[D];河南科技大學;2013年

7 李曦;雞胚蛋對免疫力低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)功能研究[D];江南大學;2012年

8 李捷;米胚蛋白的性質(zhì)及米胚油精煉工藝的研究[D];南昌大學;2012年

9 范亮;孵化期間雞胚蛋營養(yǎng)成分變化的研究[D];大連工業(yè)大學;2012年

10 呼進國;基于機器視覺的毒株胚蛋成活性自動無損檢測系統(tǒng)研究[D];青島科技大學;2014年

本文編號：2732390