【摘要】：本實驗以羊骨粉為原料,將原料進(jìn)行預(yù)處理同時用酶法提取膠原蛋白,并對膠原蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。采用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶對膠原蛋白酶解,離心獲得膠原蛋白肽再經(jīng)冷凍干燥制成膠原蛋白肽粉,測定其酶解后的水解度、肽得率、抗氧化活性和氨基酸序列。實驗研究結(jié)果如下:1.采用SDS-PAGE凝膠電泳對羊骨膠原蛋白進(jìn)行鑒定,所得膠原蛋白主要為I膠原蛋白,分子量在120KDa左右。2.以水解度、肽得率為指標(biāo),選用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶對羊骨膠原蛋白進(jìn)行酶解,確定最佳工藝。在最佳工藝條件下,胰蛋白酶的水解度為13.27%,肽得率為、82.14%,其中1000 Da以下的小肽占96.4%;木瓜蛋白酶的水解度為12.15%,肽得率為85.73%,且肽段的分子量在1000 Da以下。3.通過不同酶酶解的膠原蛋白肽,以Vc為對照組對羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和總還原能力進(jìn)行了比較測定。測得結(jié)果如下:當(dāng)肽液濃度達(dá)到1.5mg/mL時胰蛋白酶酶解的膠原蛋白肽液羥自由基清除能力顯著高于對照組Vc的清除力但差異不顯著(P0.05),其值分別為92.28%、86.39%。當(dāng)肽液濃度為20μg/mL時超氧陰離子清除率最大,其值為59.53%、51.29%,胰蛋白酶、木瓜蛋白酶解所得肽液的超氧陰離子清除能力不及對照組均且差異顯著(P0.05)。當(dāng)肽液濃度為8mg/mL時,胰蛋白酶酶解的肽液還原能力顯著大于木瓜蛋白酶酶解肽液的還原能力(P0.05)。4.采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法,測得本實驗所得肽段分子量都在1000 Da以下,肽段長度介于7～30個氨基酸之間,且含20個氨基酸以下占98%;酶切所得肽段中富含必需氨基酸,且疏水性氨基酸Leu、Tyr、Val、Ala、Ile、Phe和Trp較多。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS201.2;TS251.94
【圖文】：

圖１羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ逡逑

羊骨I型膠原蛋白電泳圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2721189