發(fā)布時間：2020-05-07 20:24

【摘要】：金剛烷胺作為一種主要用于流感病毒防治的人用抗病毒藥物,近年來雖被明令禁止,但仍被非法用于畜禽養(yǎng)殖,并隨著養(yǎng)殖廢水排放進入海洋,污染海洋環(huán)境,并在藻類等海洋生物體內(nèi)的積累,影響藻類質(zhì)量安全。當前金剛烷胺的檢測方法研究多是針對動物源性食品和飼料中藥物殘留量的檢測,關于海水中金剛烷胺的檢測技術及其在海洋環(huán)境和藻類中的分布及影響國內(nèi)外都鮮有報道,因此建立海水中痕量金剛烷胺的檢測方法,考察其在藻類中的分布與消除規(guī)律,對保障藻類的質(zhì)量安全十分重要。本論文即在上述背景下,在建立的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)的基礎上,對煙臺長島海域的海帶中金剛烷胺進行連續(xù)檢測,分析不同生長階段的海帶和海水中金剛烷胺的含量的相關性,并對其食品質(zhì)量安全影響進行評價;同時分析在不同的加工方式下,海帶中金剛烷胺的消減規(guī)律及在菊花江蘺體內(nèi)的富集和消除規(guī)律,以期為金剛烷胺對藻類產(chǎn)生的危害程度和作用機制提供基礎性資料。具體研究結(jié)果如下:(一)海水及藻類產(chǎn)品中金剛烷胺檢測方法的建立。通過優(yōu)化前處理條件、液相色譜及質(zhì)譜條件,建立了海水及藻類中金剛烷胺測定的HPLC-MS/MS法并對此方法進行驗證。結(jié)果表明:(1)藻類樣品采用1%乙酸乙腈在20℃下超聲提取20 min,提取一次時回收率可達117.75%(內(nèi)標法定量),采用分散固相萃取(QuEChERs)法進行富集凈化,凈化填料的最優(yōu)組合為500 mg PSA、500 mg C18和10 g無水硫酸鈉,回收率可達106.02%。;海水中加入10 mL 0.20 mol/L鹽酸后,用MCX固相萃取柱進行提取、富集和凈化,回收率可達59.76%。(2)對色譜流動相進行優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)使用乙腈和0.1%甲酸水作為流動相時,金剛烷胺峰形較好且響應值較高,并可與雜質(zhì)可以實現(xiàn)較好的分離,提高檢測靈敏度,減少基質(zhì)影響。通過保留時間與離子豐度比定性。(3)藻類中金剛烷胺檢出限為1.00μg/kg,定量限為2.00μg/kg;海水中金剛烷胺的檢出限為5.00 ng/L,定量限為10.00 ng/L。同時考察了該方法的準確性和精密度。結(jié)果表明:此方法準確度高,精密度好,可滿足海帶及海水中金剛烷胺殘留的高效分離及準確定性、定量分析。(二)不同海帶樣品中金剛烷胺濃度變化以煙臺長島海域筏式養(yǎng)殖海帶為研究對象,通過分析不同品種、同一品種不同生長階段及不同部位中金剛烷胺的含量,考察金剛烷胺在海帶中的累積與消除規(guī)律,并采用食品安全狀態(tài)指數(shù)和危害殘留物的風險系數(shù)評價其潛在風險。結(jié)果表明:(1)長島海域海水中金剛烷胺穩(wěn)定在1.72 ng/L~2.15 ng/L,且不同取樣點的海水中的濃度存在顯著性差異(P0.05),不同月份無顯著性差異(P0.05)。(2)不同品種的海帶對金剛烷胺的富集速率存在差異,不同海帶同一部位的富集速率隨其生長均呈現(xiàn)(3)號海帶(1)號海帶(2)號海帶的變化趨勢。(3)海帶不同部位的富集量隨其生長不斷增多,存在極顯著性差異(P0.001),收獲期時,假根和柄、葉體平直部和葉體凹凸部金剛烷胺的含量分別為48.72μg/kg、64.92μg/kg和54.14μg/kg。(4)對同一品種海帶,不同部位的富集量在生長初期無明顯差異,隨其生長,富集量呈現(xiàn)出葉體凹凸部葉體平直部結(jié)根和柄的趨勢。(5)從安全指數(shù)和風險系數(shù)評估結(jié)果來看,實驗所監(jiān)測月份的海帶是安全,低風險的,可以放心食用或加工。(三)不同加工方式對海帶中金剛烷胺含量的影響。分別考察了浸泡、漂燙、水煮、鹽漬及烘烤5種常用加工方式對海帶中金剛烷胺的殘留量變化的影響,結(jié)果表明:上述5種加工方式均可不同程度地降低海帶中金剛烷胺的殘留量,鹽漬3 h可完全除去海帶中的金剛烷胺;水煮15 min可消除海帶中57.6%的金剛烷胺;相比浸泡2 h減少65.07%和漂燙1 min減少33.90%的金剛烷胺相比,水煮工藝可在短時間內(nèi)消除較多的金剛烷胺;150℃烘烤7 min時,可將海帶中的金剛烷胺降低76.05%,但隨著烘烤時間和溫度升高,其含量又增多。(四)金剛烷胺在菊花江蘺中的富集和消除規(guī)律研究采用半靜態(tài)水質(zhì)接觸染毒法考察金剛烷胺在菊花江蘺中的富集和消除規(guī)律,并對其藥代動力學特性進行研究。結(jié)果顯示:(1)金剛烷胺在菊花江蘺中的富集量與曝污濃度呈正相關關系;且其富集量均隨曝污時間的延長逐漸增大(2)曝污濃度低時,金剛烷胺的富集系數(shù)較大;金剛烷胺在菊花江蘺中的富集系數(shù)與曝污濃度和時間均存在顯著性差異(P0.05);前期富集速率明顯快于后期,隨著時間的延長逐漸減小,而后趨于穩(wěn)定。相較于持久性有機污染物,菊花江蘺對金剛烷胺的富集能力較弱。即使在低濃度下,藻類中的金剛烷胺殘留仍可能通過食物鏈的傳遞作用被人體吸收,進而產(chǎn)生毒性作用。(3)消除實驗前期,金剛烷胺消除速率相對較快,到達一定程度后緩慢降低,并在低濃度水平維持較長時間。到消除實驗結(jié)束時,5.00μg/L、25.00μg/L和100.00μg/L曝污組,金剛烷胺分別減少了89.33%、92.38%和97.60%,表明消除速率較快,脫離暴露環(huán)境時,菊花江蘺體內(nèi)金剛烷胺的含量迅速降低。(4)對菊花江蘺中的金剛烷胺進行動力學參數(shù)推導,菊花江蘺中金剛烷胺的富集量與曝污濃度呈正相關關系;消除階段,金剛烷胺含量越高,消除速率越快。
【圖文】：

圖 1.1 金剛烷胺結(jié)構(gòu)式ig.1.1 Structure of amantad于 1960 年首次合成[2]，，，也是美國 FDA 首個金剛烷胺改善了帕金潛在益處。美國神經(jīng)學旋多巴誘發(fā)的運動障礙胺治療和預防 A 型流感可以抑制丙型肝炎病CSFV）也可以被金剛禽養(yǎng)殖業(yè)逐漸規(guī)�；R的養(yǎng)殖商戶愚昧無知

圖 2-4 金剛烷胺標準品（1.0 μg/L）總離子流圖（流動相為純水）Fig.2-4 Chromatograms of amantadine at a concentration of 1.0 μg/mL（ultrapure water）圖 2-5 金剛烷胺標準品（1.0 μg/L）總離子流圖（流動相為 0.1%甲酸水溶液）Fig.2-5 Chromatograms of amantadine at a concentration of 1.0 μg/mL（0.1% aqueous formic acid）2.3.3.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化1000.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00%-010020190325-01 3: MRM of 3 Channels ES+TIC (AMD-IS)1.98e63.2720190325-01 2: MRM of 1 Channel ES+TIC (AMD-IS)1.25e45.575.194.79
【學位授予單位】：煙臺大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：O657.63;TS254.7

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本文編號：2653506