阿爾茨海默病(AD)是一種進(jìn)行性和不可逆的神經(jīng)退行性疾病,影響著全球大約五千萬人。大量的證據(jù)表明,β-淀粉樣蛋白(Aβ)的積累和聚集是AD發(fā)病機(jī)制的中心事件,進(jìn)而引發(fā)氧化應(yīng)激,突觸損傷和神經(jīng)元丟失等病理過程。因此,Aβ被認(rèn)為是AD治療的潛在靶點(diǎn)。無機(jī)納米材料因其具有結(jié)構(gòu)可調(diào)、功能多樣和良好的理化穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn),使其在治療AD方面的應(yīng)用受到廣泛關(guān)注。本論文基于AD的病理特性,設(shè)計(jì)和合成了四類無機(jī)納米材料用于調(diào)控Aβ聚集,促進(jìn)外周Aβ清除以及緩解Aβ誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。取得的成果概括如下:1.結(jié)合二硫化鉬納米片的優(yōu)點(diǎn)和鈷配合物明確的化學(xué)性質(zhì),我們合理構(gòu)建了一種近紅外可控的人工金屬蛋白酶(MoS2-Co)。MoS2-Co通過抑制Aβ單體由無規(guī)卷曲向β-折疊結(jié)構(gòu)的構(gòu)象轉(zhuǎn)化,以及破壞Aβ纖維中已形成的β-折疊結(jié)構(gòu),從而暴露隱藏在β-折疊結(jié)構(gòu)中的蛋白水解位點(diǎn),規(guī)避β-折疊結(jié)構(gòu)對(duì)于人工金屬蛋白酶水解能力的限制。因此,MoS2-Co可以增強(qiáng)對(duì)Aβ單體和聚集體的水解能力。另外,MoS2-Co易于修飾Aβ靶向分子,提高對(duì)Aβ的選擇性,從而避免非特異性底物的水解反應(yīng)。該方法也適用于其他淀粉樣蛋白的水解。2.其次構(gòu)建...

【文章頁(yè)數(shù)】：153 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 阿爾茨海默病簡(jiǎn)述
    1.2 Aβ的產(chǎn)生和清除
        1.2.1 Aβ的產(chǎn)生
        1.2.2 Aβ的清除
    1.3 Aβ纖維化聚集機(jī)制
    1.4 Aβ聚集體的細(xì)胞毒性
    1.5 Aβ的靶向治療
        1.5.1 減少Aβ的生成
        1.5.2 靶向Aβ的清除
    1.6 本論文的研究意義及目的
    參考文獻(xiàn)
第2章 近紅外可控的人工金屬酶用于增強(qiáng)Aβ降解
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 試劑
        2.2.2 測(cè)試和表征
        2.2.3 Aβ樣品的制備
        2.2.4 胰島素樣品的制備
        2.2.5 Aβ單體的制備
        2.2.6 Aβ纖維的制備
        2.2.7 變性Aβ肽的制備
        2.2.8 MoS₂-PEG的合成
        2.2.9 MoS₂-PEI的合成
        2.2.10 MoS₂-Co的合成
        2.2.11 MoS₂-Co-LVFFA的合成
        2.2.12 Aβ聚集體的形貌分析
        2.2.13 濁度分析
        2.2.14 動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測(cè)量
        2.2.15 十二烷基苯磺酸鈉聚丙烯凝膠電泳(SDS-PAGE)
        2.2.16 原子力顯微鏡(AFM)
        2.2.17 基質(zhì)輔助激光解吸/電離質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)
        2.2.18 圓二色(CD)光譜
        2.2.19 細(xì)胞活力測(cè)定
        2.2.20 計(jì)算方法
        2.2.21 模型
    2.3 結(jié)果與討論
    2.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第3章 近紅外二區(qū)納米酶用于通過頭皮和顱骨減少Aβ沉積
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 試劑
        3.2.2 儀器和表征
        3.2.3 N-MCNs的合成
        3.2.4 Carboxyl-N-MCNs的合成
        3.2.5 KD8@N-MCNs的合成
        3.2.6 KD8@N-MCNs的光熱轉(zhuǎn)化效率
        3.2.7 ThT熒光測(cè)量
        3.2.8 濁度分析
        3.2.9 原子力顯微鏡(AFM)
        3.2.10 KD8@N-MCNs的SOD活性測(cè)定
        3.2.11 KD8@N-MCNs的CAT活性測(cè)定
        3.2.12 細(xì)胞毒性測(cè)定
        3.2.13 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的檢測(cè)
        3.2.14 KD8@N-MCNs透過血腦屏障的能力
        3.2.15 動(dòng)物模型
        3.2.16 離體大腦的近紅外熒光成像
        3.2.17 KD8@N-MCNs的生物安全性
        3.2.18 腦內(nèi)Aβ的水平
        3.2.19 莫里斯水迷宮(MWM)實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與討論
    3.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第4章 近紅外靶向增強(qiáng)的外周Aβ清除
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器與表征
        4.2.3 化合物2的制備
        4.2.4 化合物3的制備
        4.2.5 化合物4的制備
        4.2.6 ONA-P分子的制備
        4.2.7 上轉(zhuǎn)換納米粒子(UCNPs)的制備
        4.2.8 UCNP@SiO₂-NH₂的制備
        4.2.9 UCNP/ONA-P/K的制備
        4.2.10 合成FITC標(biāo)記的UCNP/ONA-P/K
        4.2.11 體外溶血實(shí)驗(yàn)
        4.2.12 莫里斯水迷宮(MWM)實(shí)驗(yàn)
        4.2.13 電跳臺(tái)躲避(step-down)實(shí)驗(yàn)
        4.2.14 細(xì)胞毒性測(cè)定
        4.2.15 免疫熒光檢測(cè)肝臟細(xì)胞對(duì)Aβ的攝取
        4.2.16 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Aβ的含量
        4.2.17 UCNP/ONA-P/K的生物分布
        4.2.18 UCNP/ONA-P/K的藥代動(dòng)力學(xué)
        4.2.19 免疫組織化學(xué)檢測(cè)3xTg-AD小鼠腦內(nèi)Aβ的水平
    4.3 結(jié)果與討論
    4.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第5章 自保護(hù)的仿生納米酶用于安全和協(xié)同地清除外周Aβ
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 試劑
        5.2.2 儀器和表
        5.2.3 提取紅細(xì)胞膜
        5.2.4 DSPE-PEG-K的合成
        5.2.5 EM-K囊泡的合成
        5.2.6 Cu_xO的合成
        5.2.7 Cu_xO@EM-K的合成
        5.2.8 Cu_xO@EM-K的SOD活性測(cè)定
        5.2.9 Cu_xO@EM-K的CAT活性測(cè)定
        5.2.10 Cu_xO@EM-K的GPx活性測(cè)定
        5.2.11 免疫熒光實(shí)驗(yàn)評(píng)估HL-7702細(xì)胞對(duì)Aβ的攝取
        5.2.12 通過ELISA測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Aβ的含量
        5.2.13 加速血液清除現(xiàn)象的評(píng)估
        5.2.14 Cu_xO@EM-K的生物安全性
        5.2.15 檢測(cè)血液中和腦內(nèi)Aβ的水平
        5.2.16 莫里斯水迷宮(MWM)實(shí)驗(yàn)
    5.3 結(jié)果與討論
    5.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第6章 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號(hào)：4034157