發(fā)布時(shí)間：2024-05-11 06:10

　　丙酮酸(Pyruvic acid)是藥物合成領(lǐng)域的重要中間體,廣泛應(yīng)用于制藥和化學(xué)工業(yè)。目前工業(yè)上合成丙酮酸的方法主要包括微生物直接發(fā)酵法和化學(xué)合成法。其中,化學(xué)合成法對(duì)于環(huán)境污染較大,且成本較高;而微生物直接發(fā)酵法中,底物對(duì)丙酮酸的轉(zhuǎn)化率不高,產(chǎn)物成分復(fù)雜且分離困難。通過生物催化法合成丙酮酸可以克服上述兩種方法的不足和缺點(diǎn),因此,在工業(yè)化應(yīng)用中具有廣闊前景。本研究利用表達(dá)源于Proteus mirabilis的L-氨基酸脫氨酶(pm1)的E.coli重組菌來催化合成丙酮酸,并從表達(dá)pm1伴侶蛋白(細(xì)胞色素b562,cyb C)、分子改造pm1以及搖瓶和罐上條件優(yōu)化等方面提高全細(xì)胞催化合成丙酮酸的效率。論文主要內(nèi)容如下:(1)在E.coli BL21(DE3)中異源表達(dá)pm1,并對(duì)發(fā)酵條件和催化條件進(jìn)行優(yōu)化,確定適宜的發(fā)酵和催化條件。其中,誘導(dǎo)溫度為25℃,誘導(dǎo)時(shí)間為14 h,誘導(dǎo)劑IPTG濃度為0.04 mM;催化過程中細(xì)胞濃度為1.5 g·L^-1,底物濃度為80 g·L^-1的D,L-丙氨酸,反應(yīng)液pH值為7.0,最終丙酮酸產(chǎn)量達(dá)到17.4...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1酒石酸法合成丙酮酸Fig.1-1Synthesisofpyruvatebytartaricacid

圖1-1酒石酸法合成丙酮酸Fig.1-1Synthesisofpyruvatebytartaricacid丙酮與空氣在45℃時(shí)混合95min，再通過氫氧酮酸。該方法需要在化學(xué)催化劑(如Pd和Pb行，對(duì)于設(shè)備條件的要求比較低。然而，由于以用于大規(guī)模的丙酮酸制....

圖2-1飽和突變及高通量篩選流程

圖2-1飽和突變及高通量篩選流程Fig.2-1Saturationmutationsandhigh-throughputprocesses提取和酶學(xué)性質(zhì)測量mMpH7.0磷酸鈉鹽緩沖液懸浮對(duì)照菌和突變菌細(xì)胞，通過超聲過10,000rpm離心1h使未....

圖3-1L-氨基酸催化丙氨酸生成丙酮酸Fig.3-1PyruvateproducedbyL-aminoaciddeaminasefromalanine

第三章結(jié)果與討論第三章結(jié)果與討論生產(chǎn)菌株的構(gòu)建文獻(xiàn)報(bào)道，來源于Proteusmirabilis的L-氨基酸脫氨酶有pm1，pma，其中pm1能高效催化L-丙氨酸合成丙酮酸(圖3-1)。因此，我們將(DE3)中進(jìn)行異源表達(dá)，構(gòu)建可以產(chǎn)pm1的E.co....

圖3-2SDS-PAGE分析蛋白表達(dá)情況

L-氨基酸催化丙氨酸生成丙酮ducedbyL-aminoaciddeami因序列設(shè)計(jì)引物，之后以eI和XhoI)酶切和純化回至感受態(tài)細(xì)胞中，通過菌驗(yàn)證。為確定pm1在E.進(jìn)行全細(xì)胞電泳分析，如近，說明已成功將pm1因是外源膜蛋白的表達(dá)在E.coli....

本文編號(hào)：3969639