酪胺及其衍生物是合成具有多種生理藥理學(xué)活性成分的重要中間體,廣泛應(yīng)用于藥品、保健品和化妝品行業(yè)。酪氨酸脫羧酶(Tyrosine decarboxylase,Tyr DC)可以催化酪氨酸的羧基去除反應(yīng)生成酪胺。利用Tyr DC合成酪胺工藝簡單、效率高、綠色環(huán)保,是具有巨大潛力的酪胺合成途徑之一。本研究對短乳桿菌(Lactobacillus brevis)來源Tyr DC重組表達(dá)的包涵體問題進(jìn)行探究發(fā)現(xiàn):(1)向LB培養(yǎng)基中添加葡萄糖、果糖、阿拉伯糖和甘露糖能夠有效提高重組Tyr DC可溶性表達(dá)水平;(2)重組Tyr DC的可溶性表達(dá)和包涵體形成是相對獨立的,酸性p H能夠促進(jìn)其可溶性表達(dá),而葡萄糖、果糖或阿拉伯糖對減少包涵體不可或缺;基于以上結(jié)果,通過向LB培養(yǎng)基中添加葡萄糖(10 g·L–1,LBG培養(yǎng)基)和控制p H 6.50–6.80的策略獲得的可溶性Tyr DC,與在LB培養(yǎng)基中僅控制p H 6.50–6.80的策略相比,Tyr DC在LBG和LB中的發(fā)酵液酶活力分別為30.70和22.00 k U·L–1,提高了1.40倍;其凍干酶粉的活力分別是46.30和12.60 U·mg...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-1IPTG對TyrDC可溶性表達(dá)（A）和酶活力（B）的影響

組TyrDC可溶性表達(dá)及其包涵體形成原誘導(dǎo)劑IPTG和葡萄糖對TyrDC可溶性表達(dá)的誘導(dǎo)劑IPTG對TyrDC表達(dá)的影響前期研究中發(fā)現(xiàn)，向LB培養(yǎng)基中添加1%葡萄成，同時促進(jìn)其可溶性表達(dá)。我們推測由于葡效應(yīng)，能夠降低重組蛋白表達(dá)水平，有利于Ty低誘導(dǎo)....

圖3-2葡萄糖對TyrDC可溶性表達(dá)（A）和酶活力（B）的影響

江南大學(xué)碩士文論可溶部分較1g·L-1時顯著減少，且基本沒有包涵體。，包涵體的減少和可溶性的增加是同步的，意味著葡進(jìn)TyrDC的可溶性表達(dá)，又能降低其包涵體形成。從圖3-2（B）酶活力角度看，在含0–2.50g·L–1葡萄相對活力增加較為明顯；在葡萄糖濃度為2.50–....

圖3-8添加不同碳源條件下分子伴侶的定量PCR結(jié)果

pH對大腸桿菌的生長有重要影響，而pH的變化取合物的利用情況，更容易利用的如葡萄糖則消耗量較多，pH下露糖則殘?zhí)橇枯^高，pH下降很慢，而后開始上升；而不被利用的。同分子伴侶對重組TyrDC可溶性表達(dá)的影響文獻(xiàn)報道，在大腸桿菌中分子伴侶負(fù)責(zé)蛋白的正確折疊，包括Gro....

圖3-15全質(zhì)粒PCR（A）和菌落PCR（B）的電泳圖分析

3-15全質(zhì)粒PCR（A）和菌落PCR（B）的電泳圖分析ysisofgelelectrophoresisbywholeplasmidPCR(A)andcolon：H98A,M99A,N100A,S101A,E102A,G296F,S297G,....

本文編號：3950097