β-淀粉酶可以從淀粉和糖原的非還原性末端切斷相隔的α-1,4-葡萄糖苷鍵,主要產(chǎn)物為麥芽糖。β-淀粉酶在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,目前工業(yè)上使用的β-淀粉酶主要從植物中提取,生產(chǎn)成本較高,限制了β-淀粉酶的應(yīng)用。相比之下,利用微生物生產(chǎn)β-淀粉酶更具優(yōu)勢(shì),但由于產(chǎn)酶水平低下,一直未能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。因此,本研究分別在大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)了巨大芽孢桿菌(Bacillus megatherium)來(lái)源β-淀粉酶基因amyM的高效異源表達(dá)并研究了重組酶酶學(xué)性質(zhì),定點(diǎn)突變amyM基因的分解代謝物響應(yīng)元件(catabolite responsive element,CRE)緩解了重組β-淀粉酶表達(dá)過(guò)程中受到的碳分解代謝物阻遏效應(yīng)(carbon catabolite repression,CCR),最后通過(guò)搖瓶發(fā)酵優(yōu)化實(shí)現(xiàn)了β-淀粉酶的高產(chǎn),為β-淀粉酶發(fā)酵生產(chǎn)的工業(yè)化提供了支撐。本論文主要內(nèi)容和結(jié)果如下:1.B.megatherium 1514β-...

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1大腸桿菌碳分解代謝物阻遏的機(jī)制[58]

江南大學(xué)碩士學(xué)位論文編碼的α-葡萄糖苷酶由麥芽糖誘導(dǎo)表達(dá)，該酶能將麥芽菌的CCR機(jī)制菌為代表的革蘭氏陰性菌株中，介導(dǎo)CCR效應(yīng)的調(diào)控sinemonophosphate,cAMP)；環(huán)腺苷酸受體蛋白(cyc腺苷酸環(huán)化酶(adenylatecyclase,AC)；P....

圖1-2枯草芽孢桿菌碳分解代謝物阻遏的機(jī)制[58]

第一章緒論桿菌的CCR效應(yīng)中起關(guān)鍵作用的調(diào)節(jié)蛋白。研究表明保守，大部分含PTS轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的低GC含量革蘭氏陽(yáng)性[46]。NA上的順式調(diào)控元件被稱為分解代謝物響應(yīng)元件(caNicholson等[63]最初在枯草芽孢桿菌α-淀粉酶基因am，將其進(jìn)行定點(diǎn)突變后，葡萄....

圖3-1片段xylR-Pxyl和amyM-6*His瓊脂糖凝膠電泳分析

ilisWB600的序列信息，以其染色體如圖3-1所示。經(jīng)測(cè)序確認(rèn)該擴(kuò)增動(dòng)子及其調(diào)控蛋白基因片段xylR-P公布的巨大芽孢桿菌β-淀粉酶基因CR擴(kuò)增，獲得大小約為1.6kb的β-淀，融合基因amyM-6*His全長(zhǎng)165碼蛋白的分子量為61kDa，肽....

圖3-2(a)表達(dá)質(zhì)粒pETMH0的構(gòu)建和(b)pETMH0雙酶切驗(yàn)證Fig3-2(a)ConstructionofexpressionplasmidpETMH0and(b)identificationofplasmidpETMH0注：M:DNAMarker;1:pETMH0/BglII+SalI

17(b)圖3-2(a)表達(dá)質(zhì)粒pETMH0的構(gòu)建和(b)pETMH0雙酶切驗(yàn)證Fig3-2(a)ConstructionofexpressionplasmidpETMH0and(b)identificationofplasmidpETMH0....

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