本課題組在前期的工作中篩選出一株巧克力微桿菌SIT101,它所產(chǎn)的酯酶能夠不對稱催化生物素中間體二甲酯生成(4S,5R)-單甲酯,產(chǎn)率和e.e值分別大于95%和99%。它是D-生物素全合成過程中的一種重要的中間體,具有極大的工業(yè)應用價值。目前,課題組前期工作中已經(jīng)對微桿菌重組酯酶進行大腸桿菌基因工程菌的構建,并完成了對該重組菌在誘導劑IPTG誘導下的發(fā)酵優(yōu)化(搖瓶水平)。本課題將繼續(xù)對該菌的發(fā)酵過程進行系統(tǒng)而深入的研究,探尋一條低成本且適合工業(yè)化應用的微桿菌重組酯酶E.coli BL21(DE3)-p ET-21a-estsit01的發(fā)酵工藝。與此同時還對大腸桿菌重組酯酶整細胞的固定化技術進行了研究。論文的第一部分,對該重組大腸桿菌進行5L發(fā)酵罐分批發(fā)酵優(yōu)化實驗,研究了誘導劑濃度、初始誘導點、誘導溫度及初始p H值對發(fā)酵產(chǎn)酶的影響。在最佳條件下,細胞發(fā)酵在12h酶活達到最大,為3886.0 U/L,此時OD600為26.29,比酶活為382.9 U/g論文的第二部分,采用了單因素方法優(yōu)化了微桿菌重組酯酶在大腸桿菌中的自誘導表達條件,包括培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件及誘導條件三個方面。經(jīng)發(fā)酵優(yōu)化...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.4生物素的分子結構

上海應用技術大學碩士學位論文第5頁圖1.4生物素的分子結構Fig.1.4Molecularstructureofbiotin由圖1.5可知，生物素中含有4個手性碳原子，理論上共有8個對映體，但是這些異構體中，只有D(+)-生物素具有生物學活性。生物素是一種維生素類藥物，因其功能強....

圖1.6內(nèi)酯-硫代內(nèi)酯的合成途徑Fig.1.6Preparationofthiolactonebylactone

第6頁上海應用技術大學碩士學位論文得到重要中間體環(huán)酸5，環(huán)酸5在醋酸酐作用下生成醋酐6，再經(jīng)過還原、硫代,得到中間體硫酮8，最后再經(jīng)過專一性氫化、取代、縮合等多步反應最終得到D-生物素。但是該合成方法的最后一步需要進行消旋體的拆分，在路線設計方面存在一定程度的不合理性。目前國外關....

圖1.7內(nèi)酯的不對稱催化醇解合成Fig.1.7Asymmetric-alcoholysissynthesisoflactone

的產(chǎn)生。2001年，Deng等人報道了使用不對稱的手性催化劑催化內(nèi)消旋的酸酐，得到合成內(nèi)酯的前體化合物(4S,5R)-單酯，產(chǎn)物的ee值為93%[36]。2003年，陳芬兒課題組[37]以氯霉素副產(chǎn)物(1S,2S)-(+)-蘇式-1-(對硝基苯基)-2-氨基-1,3-丙二醇的衍生....

圖1.8化學-酶法制備D-生物素中間體(3aS,6aR)-內(nèi)酯Fig.1.8Chem-enzymaticpreparationof(3aS,6aR)-lactoneintermediateofD-biotin

這項研究對于開環(huán)醇解時需要在低溫情況下進行，并且反應時間長等特點，所以限制了這項技術的發(fā)展應用。（圖1.7）圖1.7內(nèi)酯的不對稱催化醇解合成Fig.1.7Asymmetric-alcoholysissynthesisoflactone生物法就是利用生物酶是一種高效率并且具有選擇性....

本文編號：3898712