膠原是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)中的結(jié)構(gòu)蛋白,是一種高生物安全性的材料。膠原具有結(jié)合、保護(hù)、支撐、修復(fù)等優(yōu)良的生物功能,能參與細(xì)胞的遷移、分化和增殖,應(yīng)用研究十分廣泛。本文旨在用牛跟腱膠原制備膠原產(chǎn)品并進(jìn)行生物學(xué)性能的研究評價。本文進(jìn)行如下探究:將牛跟腱經(jīng)過前處理、脫脂、除重金屬、除雜蛋白、酶解等處理提取出膠原原液,并對其進(jìn)行表征鑒定。再制備交聯(lián)膠原膜,并進(jìn)行表觀特征和生物學(xué)評價。然后再制備中性硼硅玻璃瓶瓶裝膠原凍干產(chǎn)品,并對其進(jìn)行表觀特征和生物學(xué)評價。本文的研究結(jié)果如下:(1)對新鮮的牛跟腱進(jìn)行去除表面的筋膜、脫去脂肪、除去重金屬、除去雜蛋白等一系列的前處理。再用醋酸溶液溶解牛跟腱沉淀,并用胃蛋白酶對其進(jìn)行酶解。然后通過鹽析、透析的方法純化膠原,得到自制的膠原原液。對膠原提取條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)除雜6 h,2.5%的酶用量,酶解4 d,膠原的提取效果最優(yōu)。通過蛋白含量測定與SDS-PAGE凝膠電泳分析、氨基酸組成分析對提取的膠原原液進(jìn)行表征驗(yàn)證,結(jié)果顯示提取膠原的蛋白含量高,純度好,保持了完整的三螺旋結(jié)構(gòu),符合Ⅰ型膠原的特征,說明該提取膠原為Ⅰ型膠原。(2)將固含量為0.6%的膠原原液,...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號對照表
第1章 前言
    1.1 膠原的概述
        1.1.1 膠原的簡介
        1.1.2 膠原的功能特征
        1.1.3 膠原的應(yīng)用
    1.2 膠原的提取方法
    1.3 膠原的制備方法
    1.4 研究內(nèi)容
    1.5 研究目的和意義
第2章 膠原的提取和條件優(yōu)化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 原料與試劑
        2.1.2 儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 原材料的前處理
        2.2.2 脫脂處理
        2.2.3 去除重金屬和雜蛋白
        2.2.4 酸溶和酶解
        2.2.5 膠原粗提液鹽析
        2.2.6 去除雜蛋白的優(yōu)化
        2.2.7 膠原酶解優(yōu)化
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 脫雜時間對雜蛋白含量的影響
        2.3.2 酶解對膠原提取率的影響
    2.4 本章小結(jié)與討論
第3章 膠原的表征鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 原料與試劑
        3.1.2 儀器與設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 膠原蛋白含量的測定
        3.2.2 SDS-PAGE凝膠電泳分離膠原蛋白
        3.2.3 羥脯氨酸檢測
        3.2.4 色氨酸檢測
        3.2.5 氨基酸成分分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 膠原蛋白質(zhì)含量分析
        3.3.2 SDS-PAGE凝膠電泳分析
        3.3.3 羥脯氨酸分析
        3.3.4 色氨酸分析
        3.3.5 膠原氨基酸的組成
    3.4 本章小結(jié)與討論
第4章 膠原膜的制備與物理性能
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 原料與試劑
        4.1.2 儀器與設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 膠原膜一次凍干
        4.2.2 膠原膜交聯(lián)
        4.2.3 膠原膜二次凍干
        4.2.4 交聯(lián)條件優(yōu)化
        4.2.5 膠原膜顯微成像
        4.2.6 SEM掃描電鏡實(shí)驗(yàn)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 交聯(lián)劑濃度對降解率的影響
        4.3.2 交聯(lián)膜的表面特征
        4.3.3 SEM掃描電鏡孔隙率
    4.4 本章小結(jié)與討論
第5章 膠原膜的生物學(xué)評價
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.1.1 材料與試劑
        5.1.2 儀器與設(shè)備
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)
        5.2.2 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        5.2.3 體液免疫因子檢測
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)
        5.3.2 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        5.3.3 體液免疫因子檢測
    5.4 本章小結(jié)與討論
第6章 膠原凍干品的制備和性能研究
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        6.1.1 材料與試劑
        6.1.2 儀器與設(shè)備
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 膠原凍干產(chǎn)品的工藝流程
        6.2.2 膠原凍干產(chǎn)品預(yù)凍條件優(yōu)化
        6.2.3 膠原凍干產(chǎn)品的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 預(yù)凍方法對膠原凍干產(chǎn)品的影響
        6.3.2 膠原蛋白凍干產(chǎn)品對L929細(xì)胞毒性影響
    6.4 本章小結(jié)與討論
第7章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間的科研情況



本文編號：3837933