膠原是細胞外基質(ECM)中的結構蛋白,是一種高生物安全性的材料。膠原具有結合、保護、支撐、修復等優(yōu)良的生物功能,能參與細胞的遷移、分化和增殖,應用研究十分廣泛。本文旨在用牛跟腱膠原制備膠原產品并進行生物學性能的研究評價。本文進行如下探究:將牛跟腱經過前處理、脫脂、除重金屬、除雜蛋白、酶解等處理提取出膠原原液,并對其進行表征鑒定。再制備交聯(lián)膠原膜,并進行表觀特征和生物學評價。然后再制備中性硼硅玻璃瓶瓶裝膠原凍干產品,并對其進行表觀特征和生物學評價。本文的研究結果如下:(1)對新鮮的牛跟腱進行去除表面的筋膜、脫去脂肪、除去重金屬、除去雜蛋白等一系列的前處理。再用醋酸溶液溶解牛跟腱沉淀,并用胃蛋白酶對其進行酶解。然后通過鹽析、透析的方法純化膠原,得到自制的膠原原液。對膠原提取條件進行優(yōu)化,結果發(fā)現(xiàn)除雜6 h,2.5%的酶用量,酶解4 d,膠原的提取效果最優(yōu)。通過蛋白含量測定與SDS-PAGE凝膠電泳分析、氨基酸組成分析對提取的膠原原液進行表征驗證,結果顯示提取膠原的蛋白含量高,純度好,保持了完整的三螺旋結構,符合Ⅰ型膠原的特征,說明該提取膠原為Ⅰ型膠原。(2)將固含量為0.6%的膠原原液,...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號對照表
第1章 前言
    1.1 膠原的概述
        1.1.1 膠原的簡介
        1.1.2 膠原的功能特征
        1.1.3 膠原的應用
    1.2 膠原的提取方法
    1.3 膠原的制備方法
    1.4 研究內容
    1.5 研究目的和意義
第2章 膠原的提取和條件優(yōu)化
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 原料與試劑
        2.1.2 儀器與設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 原材料的前處理
        2.2.2 脫脂處理
        2.2.3 去除重金屬和雜蛋白
        2.2.4 酸溶和酶解
        2.2.5 膠原粗提液鹽析
        2.2.6 去除雜蛋白的優(yōu)化
        2.2.7 膠原酶解優(yōu)化
    2.3 結果與分析
        2.3.1 脫雜時間對雜蛋白含量的影響
        2.3.2 酶解對膠原提取率的影響
    2.4 本章小結與討論
第3章 膠原的表征鑒定
    3.1 實驗材料與儀器
        3.1.1 原料與試劑
        3.1.2 儀器與設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 膠原蛋白含量的測定
        3.2.2 SDS-PAGE凝膠電泳分離膠原蛋白
        3.2.3 羥脯氨酸檢測
        3.2.4 色氨酸檢測
        3.2.5 氨基酸成分分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 膠原蛋白質含量分析
        3.3.2 SDS-PAGE凝膠電泳分析
        3.3.3 羥脯氨酸分析
        3.3.4 色氨酸分析
        3.3.5 膠原氨基酸的組成
    3.4 本章小結與討論
第4章 膠原膜的制備與物理性能
    4.1 實驗材料與儀器
        4.1.1 原料與試劑
        4.1.2 儀器與設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 膠原膜一次凍干
        4.2.2 膠原膜交聯(lián)
        4.2.3 膠原膜二次凍干
        4.2.4 交聯(lián)條件優(yōu)化
        4.2.5 膠原膜顯微成像
        4.2.6 SEM掃描電鏡實驗
    4.3 結果與分析
        4.3.1 交聯(lián)劑濃度對降解率的影響
        4.3.2 交聯(lián)膜的表面特征
        4.3.3 SEM掃描電鏡孔隙率
    4.4 本章小結與討論
第5章 膠原膜的生物學評價
    5.1 實驗材料與儀器
        5.1.1 材料與試劑
        5.1.2 儀器與設備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 巨噬細胞吞噬實驗
        5.2.2 細胞毒性實驗
        5.2.3 體液免疫因子檢測
    5.3 結果與分析
        5.3.1 巨噬細胞吞噬實驗
        5.3.2 細胞毒性實驗
        5.3.3 體液免疫因子檢測
    5.4 本章小結與討論
第6章 膠原凍干品的制備和性能研究
    6.1 實驗材料與儀器
        6.1.1 材料與試劑
        6.1.2 儀器與設備
    6.2 實驗方法
        6.2.1 膠原凍干產品的工藝流程
        6.2.2 膠原凍干產品預凍條件優(yōu)化
        6.2.3 膠原凍干產品的細胞毒性實驗
    6.3 結果與分析
        6.3.1 預凍方法對膠原凍干產品的影響
        6.3.2 膠原蛋白凍干產品對L929細胞毒性影響
    6.4 本章小結與討論
第7章 結論與展望
參考文獻
致謝
在學期間的科研情況



本文編號：3837933