牛樟芝是一種生長于臺灣的珍稀藥用真菌,包含多糖、黃酮、三萜等多種活性成分,具有抗腫瘤、抗炎癥、增強免疫、保肝和護肝等多種功效。其中,三萜類化合物含量豐富,賦予牛樟芝子實體以苦味,是最重要的藥用資源研發(fā)對象之一。目前,對牛樟芝三萜的研究主要集中在培養(yǎng)基優(yōu)化、生產(chǎn)工藝優(yōu)化和子實體成分研究等方面。對于三萜類單一化合物的分離純化及構(gòu)效關(guān)系的研究則較少,限制了該資源的應(yīng)用。針對這一問題,本課題在前期固態(tài)發(fā)酵優(yōu)化的基礎(chǔ)上,對牛樟芝菌絲體三萜類化合物進行分離純化,并對其體外抗腫瘤活性與作用機制進行研究。主要的研究結(jié)果如下:1.在80℃條件下,以80%乙醇溶液對固態(tài)發(fā)酵菌絲體進行提取,固液體積比為1:60。再經(jīng)石油醚萃取,除去脂類物質(zhì),獲得的提取物即是牛樟芝粗三萜(Antrodia cinnamomea triterpenoids,ACTs)。以香草醛-冰醋酸法進行檢測,計算得三萜含量為15.90±0.90 mg/g。2.采用硅膠柱層析對ACTs進行分離。經(jīng)優(yōu)化,確定洗脫劑為異丙醇/石油醚混合液(體積比1:4)和蒸餾水,最優(yōu)徑高比為1:8。洗脫過程中,先以兩倍柱體積的異丙醇/石油醚混合液進行洗脫,再以...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 概述
    1.2 牛樟芝三萜分離純化研究進展
        1.2.1 牛樟芝三萜分離
        1.2.2 牛樟芝三萜的進一步純化
    1.3 牛樟芝三萜體外抗腫瘤作用機理
        1.3.1 經(jīng)典凋亡通路誘導細胞凋亡
        1.3.2 DNA損傷誘導凋亡
        1.3.3 抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移
    1.4 研究目的與研究內(nèi)容
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 主要內(nèi)容
2 材料方法
    2.1 菌種和細胞
    2.2 主要試劑
    2.3 主要實驗儀器
    2.4 方法
        2.4.1 牛樟芝三萜粗提物(ACTs)的獲取及含量檢測
        2.4.2 牛樟芝三萜分離條件優(yōu)化
        2.4.3 牛樟芝三萜高效液相色譜(HPLC)檢測條件的建立
        2.4.4 ACTs-c的 LC-MS檢測及非靶向代謝組分析
        2.4.5 腫瘤細胞的體外培養(yǎng)
        2.4.6 體外抗腫瘤活性的檢測
        2.4.7 牛樟芝三萜對凋亡通路蛋白的作用
        2.4.8 腫瘤細胞凋亡和周期阻滯分析
        2.4.9 細胞線粒體分離
    2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 牛樟芝三萜粗提物ACTs含量的檢測
    3.2 硅膠柱層析條件的優(yōu)化
        3.2.1 流動相的確定
        3.2.2 層析柱徑高比的確定
    3.3 ACTs的高效液相色譜分析
        3.3.1 各組分的HPLC檢測結(jié)果
        3.3.2 ACTs-a的 HPLC檢測與純化
    3.4 ACTs-c組分LC-MS檢測及非靶向代謝組學分析
    3.5 牛樟芝三萜(ACTs)的抗腫瘤活性
        3.5.1 ACTs對He La細胞的影響
        3.5.2 ACTs對 He La細胞周期阻滯的影響
        3.5.3 ACTs對 He La細胞凋亡通路蛋白與周期通路蛋白的影響
    3.6 ACTs-a的抗腫瘤活性
        3.6.1 ACTs-a對 He La細胞的影響
        3.6.2 ACTs-a對S180 細胞的影響
    3.7 ACTs-b的抗腫瘤活性
    3.8 ACTs-c的抗腫瘤活性
        3.8.1 ACT-c對He La細胞的影響
        3.8.2 ACT-c對S180細胞的影響
    3.9 ACTs-c對 He La細胞凋亡通路蛋白與周期通路蛋白的影響
4 小結(jié)與討論
    4.1 小結(jié)
    4.2 討論
    4.3 展望
參考文獻
致謝
碩士期間論文發(fā)表情況



本文編號：3817815