半乳糖凝集素(Galectins)是一類能夠特異性結(jié)合β-半乳糖的動物凝集素,目前已發(fā)現(xiàn)16種,分為原型,嵌合型,串聯(lián)重復(fù)型三種類型。半乳糖凝集素廣泛參與生物體的多種生理活動,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)糖蛋白運(yùn)輸、細(xì)胞粘附、遷移、生長和凋亡等功能,與免疫、炎癥和癌癥等多種疾病相關(guān)。在癌癥檢測方面,半乳糖凝集素可能作為診斷癌癥的重要免疫組織化學(xué)標(biāo)志物,是目前治療癌癥的藥物靶點之一。但目前,多種半乳糖凝集素的制備方法及保存條件仍不完善,限制了對半乳糖凝集素結(jié)構(gòu)及功能的研究。因此,本論文通過構(gòu)建原核表達(dá)體系,研究了穩(wěn)定、大量制備9種半乳糖凝集素的方法,并對其保存條件進(jìn)行了優(yōu)化,為半乳糖凝集素的研究奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。真菌多糖具有多種活性,毒副作用小,來源廣泛,可作為開發(fā)半乳糖凝集素抑制劑的重要資源。目前對于半乳糖凝集素與真菌多糖相互作用的研究報道較少。為了促進(jìn)半乳糖凝集素抑制劑的開發(fā),本論文研究了5種半乳糖凝集素與7種真菌多糖級分的相互作用,以其尋找半乳糖凝集素的真菌多糖類配體。為半乳糖凝集素抑制劑的研究和真菌多糖的藥物開發(fā)及腫瘤治療奠定理論基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:制備了9種半乳糖凝集素。通過構(gòu)建半乳糖...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文對照及英文縮寫詞表
第一章 前言
    1.1 半乳糖凝集素(Galectins)家族概述
        1.1.1 半乳糖凝集素的結(jié)構(gòu)與分類
        1.1.2 半乳糖凝集素的分布與功能
        1.1.3 半乳糖凝集素制備的研究進(jìn)展
        1.1.4 半乳糖凝集素多糖類抑制劑的研究進(jìn)展
    1.2 真菌多糖的概述
        1.2.1 真菌多糖的組成與結(jié)構(gòu)
        1.2.2 真菌多糖的功能
        1.2.3 青霉菌多糖的研究現(xiàn)狀
        1.2.4 杏鮑菇多糖的研究現(xiàn)狀
        1.2.5 平菇多糖的研究現(xiàn)狀
    1.3 半乳糖凝集素與真菌多糖相互作用的研究現(xiàn)狀
    1.4 選題依據(jù)和研究意義
第二章 半乳糖凝集素的表達(dá)純化
    2.1 實驗材料、試劑及儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 半乳糖凝集素重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 感受態(tài)細(xì)胞E.coli DH5α的制備
        2.2.3 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化驗證
        2.2.4 菌落PCR檢驗陽性克隆
        2.2.5 雙酶切驗證重組質(zhì)粒
        2.2.6 工程菌的保存
        2.2.7 半乳糖凝集素的制備
        2.2.8 考馬斯亮藍(lán)定量法檢測蛋白濃度
        2.2.9 SDS-PAGE法檢測目的蛋白純度
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 菌落PCR驗證陽性克隆
        2.3.2 雙酶切驗證重組質(zhì)粒
        2.3.3 半乳糖凝集素的制備
    2.4 討論
第三章 半乳糖凝集素保存條件的優(yōu)化
    3.1 實驗材料、試劑及儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 試劑配制
        3.1.4 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 半乳糖凝集素的保存條件
        3.2.2 SDS-PAGE法檢測目的蛋白純度
        3.2.3 紅細(xì)胞的制備
        3.2.4 紅細(xì)胞凝集實驗檢測目的蛋白活性
        3.2.5 目的蛋白的復(fù)溶
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 SDS-PAGE法檢測目的蛋白純度
        3.3.2 紅細(xì)胞凝集實驗
        3.3.3 紅細(xì)胞凝集實驗檢測目的蛋白活性
        3.3.4 蛋白復(fù)溶后得率統(tǒng)計
    3.4 討論
第四章 半乳糖凝集素與真菌多糖的相互作用
    4.1 實驗材料、試劑及儀器
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 試劑配制
        4.1.4 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 半乳糖凝集素誘導(dǎo)紅細(xì)胞凝集
        4.2.2 乳糖抑制半乳糖凝集素誘導(dǎo)的紅細(xì)胞凝集
        4.2.3 真菌多糖抑制半乳糖凝集素誘導(dǎo)的紅細(xì)胞凝集
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 Gal-1與真菌多糖的相互作用
        4.3.2 Gal-3與真菌多糖的相互作用
        4.3.3 Gal-4與真菌多糖的相互作用
        4.3.4 Gal-7與真菌多糖的相互作用
        4.3.5 Gal-8與真菌多糖的相互作用
    4.4 討論
論文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間公開發(fā)表論文及著作情況



本文編號：3811177