研究背景:酰胺類物質(zhì)是重要的精細(xì)化工原料和醫(yī)藥中間體。腈水合酶是一種能夠催化腈類化合物水合成酰胺類化合物的金屬酶,具有很高的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。與傳統(tǒng)的化學(xué)合成法相比,采用腈水合酶生物催化法生產(chǎn)酰胺類化合物具有反應(yīng)條件溫和、專一性強(qiáng)、催化效率高的優(yōu)勢(shì)。但目前從自然界土壤取樣分離篩選獲得野生產(chǎn)酶菌株的方式具有偶然性大、成功率低、酶活力差等局限性,而通過(guò)基因克隆手段獲得高效表達(dá)腈水合酶的基因工程菌具有生物遺傳背景清晰、適應(yīng)性強(qiáng)、發(fā)酵周期短、有利于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模培養(yǎng)和工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn),符合經(jīng)濟(jì)環(huán)保的綠色化工發(fā)展方向。研究目的:探究紅球菌Rhodococcus erythropolis CCM2595來(lái)源的腈水合酶的相關(guān)性能,以期為工業(yè)化生產(chǎn)酰胺類物質(zhì)提供理論依據(jù)。研究方法:(1)設(shè)計(jì)質(zhì)粒:通過(guò)基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)腈水合酶在大腸桿菌中的異源表達(dá);(2)探究腈水合酶的底物特異性:選用靜息工程菌細(xì)胞與不同腈類底物(丙烯腈、丙二腈、煙腈、己二腈、對(duì)苯二腈、苯甲腈)反應(yīng),使用氣液相色譜檢測(cè)反應(yīng)結(jié)果;(3)探究靜息細(xì)胞反應(yīng)影響因素:從溫度穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性、最適溫度、最適pH、底物耐受性等方面探究對(duì)酶活的影響;(4)...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 生物催化
        1.1.1 生物催化概述
        1.1.2 生物催化研究歷程
        1.1.3 腈類化合物的生物催化過(guò)程
    1.2 腈水合酶
        1.2.1 腈水合酶的來(lái)源和分布
        1.2.2 腈水合酶的結(jié)構(gòu)和特點(diǎn)
        1.2.3 腈水合酶的催化機(jī)理
        1.2.4 腈水合酶的應(yīng)用
    1.3 重組腈水合酶
    1.4 本論文的課題意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)菌株和載體
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 質(zhì)粒表達(dá)驗(yàn)證
        2.2.3 酶的純化
        2.2.4 酶活測(cè)定
        2.2.5 催化性能探究
        2.2.6 相關(guān)溶液配制
3 結(jié)果與討論
    3.1 ReNHase質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)
    3.2 腈水合酶的底物特異性
        3.2.1 腈水合酶的底物
        3.2.2 催化己二腈反應(yīng)
    3.3 重組Re NHase靜息細(xì)胞催化性能探究
        3.3.1 溫度
        3.3.2 pH
        3.3.3 底物濃度
    3.4 腈水合酶ReNHase-His的純化
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 A ReNHase基因序列
附錄 B ReNHase質(zhì)粒測(cè)序比對(duì)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：3797528