海洋微生物對環(huán)境脅迫響應與適應是當今環(huán)境微生物學研究領域前沿科學問題。據(jù)報道,在海洋玫瑰桿菌屬和SAR11屬模式菌株中存在磷限制條件下細胞膜脂重構現(xiàn)象,海洋細菌通過合成一系列無磷含氮膜脂和糖脂代替細胞正常磷脂,以應對海洋生態(tài)低磷環(huán)境。因此,海洋細菌在磷限制條件下細胞膜脂代謝和調(diào)控機制成為該領域研究的前沿和熱點。海洋異養(yǎng)細菌Candidatus Pelagibacter sp.HTCC7211在磷缺乏下膜脂重構過程中磷脂酶PlcP已得到較為深入研究,但對膜脂重構(Lipid Remodelling)中另一個關鍵酶糖基轉(zhuǎn)移酶研究較少。利用生物化學和生物信息學方法,對糖基轉(zhuǎn)移酶的生化性質(zhì)和催化反應機制等進行廣泛研究,闡明糖基轉(zhuǎn)移酶在海洋細菌糖脂合成過程中的具體功能,對理解海洋細菌膜脂重構生物功能具有重要意義。本文從GenBank得到GT_cp的核苷酸序列,通過體外PCR技術擴增目的基因,用NdeI和SalI酶切目的基因與載體連接,獲得重組質(zhì)粒pET15b/GT_cp,并將其在Escherichia coli BL21中成功表達。借助去垢劑溶解目的蛋白,...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 甘油糖脂
        1.1.1 甘油糖脂的分類
        1.1.2 甘油糖脂的生物功能
        1.1.3 酶的合成
        1.1.4 甘油糖脂的提取方法
        1.1.5 甘油糖脂的純化與分離方法
    1.2 磷限制下海洋細菌中的膜質(zhì)重構
    1.3 本課題的立題意義及研究內(nèi)容
        1.3.1 立題依據(jù)與意義
        1.3.2 研究內(nèi)容
第二章 糖基轉(zhuǎn)移酶GTCP基因克隆、表達純化與活性分析
    2.1 試驗材料與儀器
        2.1.1 質(zhì)粒和感受態(tài)細胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 基因GT_cp的克隆和重組質(zhì)粒的構建
        2.2.2 酶的表達與純化
        2.2.3 糖基轉(zhuǎn)移酶GT_cp活性檢測
    2.3 結果與討論
        2.3.1 基因GT_cp的克隆
        2.3.2 糖基轉(zhuǎn)移酶GT_cp的純化
        2.3.3 酶的活性分析
    2.4 小結
第三章 糖基轉(zhuǎn)移酶GTCP的酶學性質(zhì)研究
    3.1 試驗材料與儀器
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 溫度對酶活的影響
        3.2.2 pH對酶活的影響
        3.2.3 Na Cl濃度對酶活的影響
        3.2.4 金屬離子對酶活的影響
        3.2.5 表面活性劑、還原劑和變性劑對酶活的影響
        3.2.6 動力學研究
        3.2.7 GT_cp在最佳條件下催化DAG生成MGlu-DAG
    3.3 結果與討論
        3.3.1 溫度對GT_cp的影響
        3.3.2 pH對 GT_cp酶活的影響
        3.3.3 Na Cl濃度對GT_cp酶活的影響
        3.3.4 金屬離子對GT_cp轉(zhuǎn)糖基活性的影響
        3.3.5 表面活性劑、還原劑和變性劑對GT_cp酶活的影響
        3.3.6 GT_cp的底物特異性
        3.3.7 最佳條件下GT_cp催化DAG生成MGlu-DAG
    3.4 小結
第四章 酶的生物信息學分析與點突變體構建
    4.1 材料與方法
    4.2 結果與討論
        4.2.1 GT_cp的氨基酸序列和結構分析
        4.2.2 GT_cp的催化機制與底物結合機制研究
    4.3 小結
第五章 結論與展望
    5.1 結論
    5.2 展望
參考文獻
附錄1 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文目錄
致謝



本文編號：3790332