皮膚病已成為當(dāng)今世界公認(rèn)的最常見疾病及多發(fā)病之一,嚴(yán)重影響人類的身體健康。目前,氨基酸螯合鈣經(jīng)皮貼劑在臨床上治療皮炎濕疹類皮膚病,具有顯著療效,但其種類較少,亟待研發(fā)新藥。�；撬狎镶}(Taurine chelate calcium,TCCa)是本實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的鈣制劑,其經(jīng)皮吸收性能優(yōu)于常用鈣制劑,之前已完成制備及表征,并建立完善促透體系,但是TCCa在體內(nèi)作用方式及藥物修復(fù)機(jī)制尚未明確。因此,本文研究TCCa在體液中的穩(wěn)定性及解離機(jī)理,并從細(xì)胞層面和基因?qū)用骊U明TCCa對皮膚屏障的修復(fù)機(jī)制,對于推動(dòng)TCCa的臨床應(yīng)用具有重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。本文首先研究TCCa在體液中的穩(wěn)定性及解離機(jī)理。采用分光光度法測定TCCa的穩(wěn)定常數(shù)為K穩(wěn)=4.08×1010,實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證TCCa是由兩個(gè)�；撬岬陌被突撬峄c中心鈣離子結(jié)合生成的二環(huán)相連六元環(huán)狀結(jié)構(gòu)。采用D-Hanks平衡鹽溶液模擬人體缺鈣體液環(huán)境,研究解離時(shí)間、解離溫度、解離pH對TCCa鈣解離率的影響,測得在缺鈣體液中TCCa在前2 h達(dá)到解離平衡,在人體體液環(huán)境37℃、pH=7時(shí)鈣解離率達(dá)15.0±0.3%,其解離速度及鈣解離率均優(yōu)于...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 緒論
    1.1 皮膚屏障功能
        1.1.1 人體皮膚結(jié)構(gòu)
        1.1.2 皮膚滲透與吸收
        1.1.3 皮膚屏障功能及相關(guān)基因
    1.2 鈣與人體健康
        1.2.1 鈣的生理功能
        1.2.2 鈣的吸收與代謝
        1.2.3 鈣與皮膚
            1.2.3.1 表皮鈣梯度對皮膚的影響
            1.2.3.2 鈣調(diào)控表皮增殖分化
            1.2.3.3 鈣促進(jìn)損傷表皮修復(fù)和再上皮化
            1.2.3.4 鈣影響皮膚黑色素合成
            1.2.3.5 鈣在皮膚病治療的應(yīng)用
    1.3 鈣制劑的發(fā)展
        1.3.1 無機(jī)鈣
        1.3.2 有機(jī)酸鈣
        1.3.3 氨基酸螯合鈣
        1.3.4 多肽螯合鈣
    1.4 螯合物穩(wěn)定常數(shù)測定方法
        1.4.1 分光光度法
        1.4.2 電位法
        1.4.3 極譜法
    1.5 �；撬狎镶}研究的國內(nèi)外概況
        1.5.1 �；撬釋ζつw的作用
            1.5.1.1 �；撬嵩谌梭w中的分布
            1.5.1.2 �；撬釋︹}離子的調(diào)節(jié)作用
            1.5.1.3 �；撬釋ζつw的作用
        1.5.2 �；撬狎镶}制備及表征
        1.5.3 �；撬狎镶}經(jīng)皮吸收性能
    1.6 本課題研究意義及內(nèi)容
        1.6.1 本課題研究意義
        1.6.2 本課題研究內(nèi)容
第二章 �；撬狍Ш镶}穩(wěn)定常數(shù)測定及解離機(jī)理探究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.3.1 測定穩(wěn)定常數(shù)實(shí)驗(yàn)原理
            2.2.3.2 紫外吸收光譜相關(guān)溶液配制
            2.2.3.3 螯合物紫外吸收光譜的測定
            2.2.3.4 解離時(shí)間對TCCa鈣解離率的影響
            2.2.3.5 解離溫度對TCCa鈣解離率的影響
            2.2.3.6 解離pH對TCCa鈣解離率的影響
            2.2.3.7 不同氨基酸螯合鈣的鈣解離率比較
            2.2.3.8 TCCa鈣解離率的測定
            2.2.3.9 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 TCCa穩(wěn)定常數(shù)測定
        2.3.2 解離時(shí)間對TCCa鈣解離率的影響
        2.3.3 解離溫度對TCCa鈣解離率的影響
        2.3.4 解離pH對TCCa鈣解離率的影響
        2.3.5 不同氨基酸螯合鈣的鈣解離率比較
    2.4 本章小結(jié)
第三章 牛磺酸螯合鈣對HaCaT細(xì)胞增殖的作用
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.3.1 試劑配制
            3.2.3.2 HaCaT細(xì)胞復(fù)蘇
            3.2.3.3 HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2.3.4 HaCaT細(xì)胞傳代
            3.2.3.5 HaCaT細(xì)胞凍存
            3.2.3.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            3.2.3.7 細(xì)胞處理
            3.2.3.8 細(xì)胞貼壁率測定
            3.2.3.9 克隆形成率測定
            3.2.3.10 細(xì)胞增殖活性測定
            3.2.3.11 TCCa與三代鈣制劑的比較
            3.2.3.12 統(tǒng)計(jì)分析方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.3.1 正常培養(yǎng)時(shí)TCCa對細(xì)胞增殖的作用
            3.3.1.1 TCCa對細(xì)胞增殖及分化的影響
            3.3.1.2 TCCa對細(xì)胞貼壁率的影響
            3.3.1.3 TCCa對細(xì)胞克隆形成率的影響
            3.3.1.4 TCCa對細(xì)胞增殖活性的影響
        3.3.2 缺鈣環(huán)境下TCCa對細(xì)胞增殖的作用
            3.3.2.1 TCCa對細(xì)胞貼壁率的影響
            3.3.2.2 TCCa對細(xì)胞克隆形成率的影響
            3.3.2.3 TCCa對細(xì)胞增殖活性的影響
            3.3.2.4 TCCa與無機(jī)鈣的作用比較
            3.3.2.5 TCCa與有機(jī)酸鈣的作用比較
            3.3.2.6 TCCa與其他氨基酸螯合鈣的作用比較
    3.4 本章小結(jié)
第四章 �；撬狎镶}對皮膚屏障相關(guān)基因的調(diào)控
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.3.1 HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞計(jì)數(shù)
            4.2.3.2 細(xì)胞處理
            4.2.3.3 RNA抽提
            4.2.3.4 RNA濃度檢測
            4.2.3.5 RNA反轉(zhuǎn)錄
            4.2.3.6 引物設(shè)計(jì)與合成
            4.2.3.7 熒光定量PCR
            4.2.3.8 統(tǒng)計(jì)分析方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.3.1 鈣離子對皮膚屏障相關(guān)基因的調(diào)控作用
            4.3.1.1 鈣離子對角蛋白和絲聚蛋白相關(guān)基因的調(diào)控作用
            4.3.1.2 鈣離子對緊密連接相關(guān)基因的調(diào)控作用
        4.3.2 TCCa對皮膚屏障相關(guān)基因的調(diào)控作用
            4.3.2.1 TCCa對基底層角蛋白基因的調(diào)控作用
            4.3.2.2 TCCa對有棘層角蛋白基因的調(diào)控作用
            4.3.2.3 TCCa對絲聚蛋白相關(guān)基因的調(diào)控作用
            4.3.2.4 TCCa對緊密連接相關(guān)基因的調(diào)控作用
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與建議
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 建議
參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表學(xué)術(shù)論文及科研成果
作者及導(dǎo)師簡介
附件



本文編號：3760677