骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種退行性關(guān)節(jié)疾病,其特征在于關(guān)節(jié)的慢性疼痛和運(yùn)動(dòng)障礙。盡管目前對(duì)OA的潛在機(jī)制仍知之甚少,但已提出炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激在OA的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。在炎性刺激中,促炎細(xì)胞因子白介素-1β(IL-1β)通過刺激促成軟骨降解的多種介質(zhì)在OA的發(fā)病過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞在維持正常組織合成和胞外基質(zhì)(ECM)的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。IL-1β可上調(diào)軟骨細(xì)胞中主要蛋白酶(如MMP)的表達(dá)誘導(dǎo)軟骨降解,造成活性氧(ROS)的產(chǎn)生和炎癥介質(zhì)例如一氧化氮(NO)釋放及一氧化氮合酶的表達(dá)增加等,也可以通過損傷線粒體DNA、抑制轉(zhuǎn)錄等方式促進(jìn)軟骨細(xì)胞凋亡。因此,能夠針對(duì)IL-1β誘導(dǎo)炎癥的藥物有望成為有效治療OA的新策略。鹿茸多肽(VAP)是從鹿茸中分離提取的多肽類活性單體,具有重要的研究?jī)r(jià)值,已有研究表明其在抑制炎癥過程中的重要作用。因此,本課題以提取的兔原代軟骨細(xì)胞為研究對(duì)象,旨在探究VAP對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞的氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)的作用及其潛在的分子作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)所用的鹿茸多肽為本實(shí)驗(yàn)室前期提取獲得的 32 肽,其氨基酸序列...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 骨關(guān)節(jié)炎
    1.2 OA生物學(xué)標(biāo)志
        1.2.1 IL
        1.2.2 ROS
        1.2.3 NO
        1.2.4 MMPS
        1.2.5 軟骨細(xì)胞凋亡
    1.3 鹿茸
        1.3.1 鹿茸多肽
        1.3.2 鹿茸多肽與OA
        1.3.3 鹿茸補(bǔ)腎湯
    1.4 骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)信號(hào)通路
        1.4.1 Notch信號(hào)通路與OA
        1.4.2 MAPKs信號(hào)通路與OA
        1.4.3 Wnt信號(hào)通路與OA
        1.4.4 NF-κB信號(hào)通路與OA
        1.4.5 TGF-β信號(hào)通路與OA
    1.5 本研究的內(nèi)容及意義
2 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)及鹿茸多肽活性驗(yàn)證
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 溶液配置
        2.2.2 軟骨細(xì)胞分離
        2.2.3 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.5 軟骨細(xì)胞鑒定
        2.2.6 藥物MTT實(shí)驗(yàn)
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 原代軟骨細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.3.2 軟骨細(xì)胞表型鑒定
        2.3.3 鹿茸多肽對(duì)軟骨細(xì)胞毒性作用
    2.4 本章小結(jié)
3 VAP對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞的作用效果
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 溶液配置
        3.2.2 活性氧檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 一氧化氮檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 蛋白免疫印跡分析
        3.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 結(jié)果及討論
        3.3.1 VAP對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞的活性影響
        3.3.2 VAP抑制IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生
        3.3.3 VAP抑制IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)水平
        3.3.4 VAP減少IL-1β誘導(dǎo)的NO的產(chǎn)生
        3.3.5 VAP抑制IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞iNOS的表達(dá)
        3.3.6 VAP調(diào)節(jié)IL-1β誘導(dǎo)的凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.3.7 VAP調(diào)節(jié)IL-1β誘導(dǎo)的TGF-β/Smad信號(hào)通路
    3.4 本章小結(jié)
4 鹿茸補(bǔ)腎湯對(duì)兔骨關(guān)節(jié)炎模型的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 溶液配制
        4.2.2 動(dòng)物分組及處理
        4.2.3 血常規(guī)檢測(cè)
        4.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4.3 結(jié)果及討論
        4.3.1 鹿茸補(bǔ)腎湯對(duì)骨關(guān)節(jié)炎新西蘭大耳白兔體重影響
        4.3.2 20項(xiàng)血液參數(shù)測(cè)定結(jié)果
        4.3.3 白細(xì)胞系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果
    4.4 本章小結(jié)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：3753626