馬氏珠母貝(Pinctada martensii),因盛產(chǎn)優(yōu)質(zhì)珍珠而聞名于世,是中國南方沿海地區(qū)培育珍珠的主要貝類。珍珠主要通過外套膜包裹珠核進(jìn)行人工“插核手術(shù)”后培育,整個(gè)過程會伴隨著貝體的炎癥及免疫反應(yīng)。因此,珍珠貝的外套膜在珍珠形成中起著重要的作用。目前,珍珠貝在采珠后的貝肉多被廢棄,其外套膜主要營養(yǎng)成分是蛋白質(zhì),所以,充分開發(fā)利用外套膜的功能價(jià)值是非常必要的。本文采用酶法制備馬氏珠母貝外套膜酶解產(chǎn)物,通過體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行皮膚創(chuàng)傷愈合功能作用的研究,為進(jìn)行深入研究提供理論基礎(chǔ)和方向。本研究主要內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)通過酶法制備馬氏珠母貝外套膜酶解物(EHMPM),建立小鼠皮膚全皮層創(chuàng)傷模型,以涂抹和灌胃給藥兩種方式評價(jià)其促愈合活性。EHMPM蛋白質(zhì)含量為55.66 g/100g,其中,肽含量占蛋白含量的21.56%;必需氨基酸占總氨基酸的63.02%;支鏈氨基酸分別占總氨基酸的32.92%;疏水性氨基酸占總氨基酸的59.75%。與陰性對照組相比,涂抹給藥EHMPM能顯著縮短止血時(shí)間,無毒性;兩種方式給藥EHMPM均顯著縮短上皮化時(shí)間,提高傷口愈合率。第7天,與兩個(gè)對照組相比,涂...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 緒論
    1.1 皮膚創(chuàng)傷愈合概況
    1.2 天然促愈活性物質(zhì)研究進(jìn)展
        1.2.1 陸生植物來源的活性物質(zhì)
        1.2.2 陸生動物來源的活性物質(zhì)
        1.2.3 海洋來源的活性物質(zhì)
    1.3 海洋貝類創(chuàng)傷愈合研究進(jìn)展及存在問題
        1.3.1 海洋貝類在炎癥和創(chuàng)傷愈合的的傳統(tǒng)使用
        1.3.2 海洋貝類的抗炎作用及促愈活性研究進(jìn)展
    1.4 珍珠貝活性物質(zhì)研究進(jìn)展
        1.4.1 解酒護(hù)肝
        1.4.2 改善記憶
        1.4.3 抗氧化作用
        1.4.4 保濕作用
        1.4.5 其他活性發(fā)現(xiàn)
    1.5 本課題研究的目的意義和主要內(nèi)容
        1.5.1 研究目的及意義
        1.5.2 研究內(nèi)容
2 馬氏珠母貝外套膜酶解物促進(jìn)小鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)研究
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 EHMPM制備及主要成分分析
        2.2.2 EHMPM游離氨基酸組成分析
        2.2.3 EHMPM急性皮膚毒性試驗(yàn)
        2.2.4 EHMPM體外抗菌實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 EHMPM體表促凝血實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 動物分組及創(chuàng)傷模型建立
        2.2.7 愈合率及瘢痕殘留率
        2.2.8 創(chuàng)面組織中生化指標(biāo)測定
        2.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 EHMPM的主要成分分析
        2.3.2 涂抹給藥酶解物對創(chuàng)傷修復(fù)的影響
        2.3.3 灌胃給藥酶解物對創(chuàng)傷修復(fù)的影響
    2.4 討論
        2.4.1 EHMPM對抗菌的影響
        2.4.2 EHMPM對止血的影響
        2.4.3 EHMPM對創(chuàng)面愈合的影響
        2.4.4 EHMPM對炎癥細(xì)胞因子的影響
        2.4.5 EHMPM對增殖期生長因子的影響
        2.4.6 EHMPM對組織重塑的影響
    2.5 本章小結(jié)
3 馬氏珠母貝外套膜酶解超濾組分促進(jìn)小鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)研究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 材料與試劑
        3.1.2 儀器與設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 UCEHMPM制備
        3.2.2 UCEHMPM主要營養(yǎng)成分分析
        3.2.3 UCEHMPM游離氨基酸組成分析
        3.2.4 UCEHMPM急性皮膚毒性試驗(yàn)
        3.2.5 UCEHMPM體外抗菌實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 UCEHMPM體外促凝血實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 動物分組及創(chuàng)傷模型建立
        3.2.8 愈合率及瘢痕殘留率
        3.2.9 ELISA分析
        3.2.10 組織學(xué)評估的組織準(zhǔn)備
        3.2.11 H&E和 Masson染色
        3.2.12 免疫組織化學(xué)
        3.2.13 天狼星紅苦味酸染色
        3.2.14 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 UCEHMPM的主要成分分析
        3.3.2 體外抗菌實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 體外促凝血實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 涂抹給藥超濾組分對創(chuàng)傷修復(fù)的影響
        3.3.5 灌胃給藥超濾組分對創(chuàng)傷修復(fù)的影響
    3.4 討論
        3.4.1 UCEHMPM營養(yǎng)成分對創(chuàng)傷愈合的影響
        3.4.2 UCEHMPM對止血及抗菌的影響
        3.4.3 UCEHMPM對創(chuàng)面愈合的影響
        3.4.4 UCEHMPM對炎癥細(xì)胞因子的影響
        3.4.5 UCEHMPM對細(xì)胞增殖期上皮化的影響
        3.4.6 UCEHMPM對組織重塑的影響
    3.5 本章小結(jié)
4 馬氏珠母貝外套膜生物活性肽分離純化及機(jī)制初步探討
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 材料與試劑
        4.1.2 儀器與設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 馬氏珠母貝外套膜<3 KDa超濾組分的制備
        4.2.2 <3 KDa超濾組分的主要肽序列分析
        4.2.3 Sephadex G-25 凝膠過濾層析
        4.2.4 HaCaT和 HSF增殖實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 <3 KDa超濾組分分子量分布的質(zhì)譜分析
        4.3.2 <3 KDa超濾組分的特征肽序列分析
        4.3.3 <3 KDa超濾組分對細(xì)胞增殖的影響
        4.3.4 Sephadex G-25 分離純化及對細(xì)胞增殖的影響
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
5 馬氏珠母貝外套膜活性肽軟膏制備及促愈修復(fù)探討
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 材料與試劑
        5.1.2 儀器與設(shè)備
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 馬氏珠母貝外套膜< 3KDa超濾組分的制備
        5.2.2 馬氏珠母貝外套膜活性肽的軟膏制備
        5.2.3 軟膏急性皮膚毒性試驗(yàn)
        5.2.4 動物分組及創(chuàng)傷模型建立
        5.2.5 愈合率及瘢痕殘留率
        5.2.6 ELISA分析
        5.2.7 組織學(xué)評估的組織準(zhǔn)備
        5.2.8 H&E染色
        5.2.9 免疫組織學(xué)
        5.2.10 天狼星紅苦味酸染色
        5.2.11 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 軟膏外觀及形狀
        5.3.2 急性皮膚毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.3 創(chuàng)面形態(tài)變化觀察
        5.3.4 愈合率及愈合時(shí)間
        5.3.5 炎癥因子測定
        5.3.6 生長因子測定
        5.3.7 軟膏給藥小鼠創(chuàng)傷的組織學(xué)評價(jià)
        5.3.8 軟膏給藥小鼠創(chuàng)傷免疫組學(xué)分析
        5.3.9 軟膏對TGF-β/Smad信號通路的影響
        5.3.10 軟膏對膠原蛋白和瘢痕形成的影響
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
6 結(jié)論與展望
    6.1 研究結(jié)論
    6.2 研究創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介



本文編號：3735972