發(fā)布時間：2023-02-01 10:44

　　灰樹花（Grifola frondosa）富含蛋白質、膳食纖維、多糖和微量元素等多種營養(yǎng)成分,其中多糖是其主要活性物質,具有免疫調節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、降血糖和降血脂等生物活性。富硒灰樹花多糖是一種有機硒化合物,兼具多糖和硒的雙重生物活性。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),從富硒灰樹花子實體中提取分離純化得到的富硒灰樹花多糖（Se-GFP）具有較好的體內(nèi)抗腫瘤活性,可以增強免疫抑制小鼠的免疫活性和抗氧化活性,而目前對Se-GFP在體外吸收和體內(nèi)代謝動力學研究尚未見報道。因此本文通過建立結腸癌細胞（Caco-2）單層培養(yǎng)模型,研究Se-GFP在體外的轉運和攝取;采用異硫氰酸熒光素（FITC）通過還原胺化反應對Se-GFP進行熒光標記,進行大鼠體內(nèi)的代謝動力學研究,本研究可為多糖類化合物的吸收和代謝動力學研究與應用提供基礎,具有較重要的理論和實際意義。主要研究內(nèi)容如下:（1）采用Caco-2單層細胞培養(yǎng)模型,從富硒灰樹花中多糖和硒兩個方面研究富硒灰樹花多糖（Se-GFP）的轉運與攝取。結果表明,富硒灰樹花多糖Se-GFP在Caco-2細胞中的轉運具有時間和濃度依賴型,在腸腔側（AP側）比基底側（BL側）... 

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 多糖的腸道上皮細胞吸收研究進展
        1.1.1 腸道概述
        1.1.2 腸道吸收屏障結構
        1.1.3 腸上皮細胞物質吸收轉運途徑
        1.1.4 Caco-2 細胞模型概述
        1.1.5 多糖在Caco-2 細胞模型中的吸收研究
    1.2 多糖的代謝動力學研究進展
        1.2.1 多糖的代謝動力學研究概況
        1.2.2 多糖的代謝動力學研究方法
    1.3 富硒灰樹花多糖的研究進展
        1.3.1 富硒灰樹花多糖的結構
        1.3.2 富硒灰樹花多糖的生物活性
        1.3.3 富硒灰樹花多糖的吸收和代謝動力學研究進展
    1.4 本課題的研究目的與意義
    1.5 本課題研究的主要內(nèi)容
第二章 富硒灰樹花多糖在Caco-2 細胞模型中轉運和攝取的研究
    2.1 儀器、材料與試劑
        2.1.1 儀器
        2.1.2 材料與試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 Caco-2 細胞的培養(yǎng)
        2.2.2 富硒灰樹花多糖對Caco-2 細胞活力的影響
        2.2.3 Caco-2 細胞吸收模型的建立
        2.2.4 Caco-2 細胞吸收模型的評估
        2.2.5 多糖和硒含量的測定
        2.2.6 Caco-2 細胞的雙向跨膜轉運實驗
        2.2.7 Caco-2 細胞的攝取實驗
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理和分析
    2.3 結果和討論
        2.3.1 富硒灰樹花多糖對Caco-2 細胞活力的影響
        2.3.2 Caco-2 細胞吸收模型的評估
        2.3.3 轉運實驗結果
        2.3.4 攝取實驗結果
        2.3.5 富硒灰樹花多糖在轉運和攝取過程中硒含量的變化
    2.4 本章小結
第三章 富硒灰樹花多糖的熒光標記及在生物樣品中的穩(wěn)定性研究
    3.1 儀器、材料與試劑
        3.1.1 儀器
        3.1.2 材料與試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 富硒灰樹花多糖熒光標記物的制備
        3.2.2 Se-GFP-FITC的分析
        3.2.3 Se-GFP-FITC的體外穩(wěn)定性研究
    3.3 結果和討論
        3.3.1 Se-GFP-FITC的熒光標記結果
        3.3.2 Se-GFP-FITC的紫外可見光譜分析
        3.3.3 Se-GFP-FITC的熒光光譜分析
        3.3.4 Se-GFP-FITC中 FITC的取代度
        3.3.5 Se-GFP-FITC的純度分析
        3.3.6 Se-GFP-FITC的紅外光譜分析
        3.3.7 Se-GFP-FITC的分子量分析
        3.3.8 Se-GFP-FITC的體外穩(wěn)定性
    3.4 本章小結
第四章 富硒灰樹花多糖在大鼠體內(nèi)的代謝動力學研究
    4.1 儀器、材料與試劑
        4.1.1 儀器
        4.1.2 材料與試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 溶液的配制
        4.2.2 Se-GFP-FITC定量分析方法的研究
        4.2.3 Se-GFP-FITC在大鼠體內(nèi)代謝動力學研究
    4.3 結果和討論
        4.3.1 血漿中Se-GFP-FITC濃度的測定
        4.3.2 尿液中Se-GFP-FITC濃度的測定
        4.3.3 糞便中Se-GFP-FITC濃度的測定
        4.3.4 組織樣品中Se-GFP-FITC濃度的測定
        4.3.5 體內(nèi)代謝動力學研究
        4.3.6 組織分布
        4.3.7 排泄
    4.4 本章小結
第五章 結論與展望
    5.1 結論
    5.2 展望
參考文獻
致謝
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【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3734118