天然淀粉中抗性淀粉（RS）含量較低,大量攝入可引發(fā)代謝綜合相關疾病,通過酶法改性得到的改性淀粉中RS含量有所提高,對人類生理健康具有極大益處。分支酶（branching enzyme）包括淀粉分支酶和糖原分支酶兩大類,它能催化α-1,4鍵的斷裂,形成α-1,6分支點,在改性淀粉制備中具有巨大應用潛能。本文對直鏈淀粉親和性高且來源于Rhodothemus obamensis的淀粉分支酶（RoBE）和對支鏈淀粉親和性高且來源于Vibrio vulnificus的糖原分支酶（VvGBE）在Escherichia coli BL21（DE3）中表達,研究它們的酶學性質及底物特異性,探究了制備改性淀粉的工藝條件,對改性淀粉產物的理化性質進行了分析。此外,將VvGBE在Bacillus subtilis WS11中進行表達,探索了啟動子對其表達量的影響。主要研究結果如下:（1）將Vibrio vulnificus和Rhodothemus obamensis來源的分支酶基因在E.coli BL21（DE3）中表達,經搖瓶發(fā)酵,它們對支鏈淀粉的胞內酶活分別為2.06 U·mL^-1... 

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 淀粉的概述
        1.1.1 淀粉消化性分類
        1.1.2 改性淀粉的功能
        1.1.3 淀粉改性的方法
    1.2 分支酶的概述
        1.2.1 分支酶的來源及性質
        1.2.2 分支酶在改性淀粉制備中的應用
    1.3 大腸桿菌和枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)的概述
        1.3.1 大腸桿菌表達系統(tǒng)的簡介
        1.3.2 枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)的簡介
    1.4 立題依據及意義
    1.5 本論文的研究內容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌種與質粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要培養(yǎng)基
    2.2 分子生物學操作方法
        2.2.1 重組E.coli質粒的構建
        2.2.2 重組B.subtilis質粒的構建
        2.2.3 不同啟動子表達質粒的構建
        2.2.4 E.coli感受態(tài)的制備及熱激法轉化
        2.2.5 B.subtilis感受態(tài)的制備及電擊法轉化
    2.3 發(fā)酵方法
        2.3.1 重組E.coli的搖瓶發(fā)酵
        2.3.2 重組B.subtilis的搖瓶發(fā)酵
    2.4 分析方法
        2.4.1 菌體濃度的測定
        2.4.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳分析
        2.4.3 分支酶酶活的測定
        2.4.4 蛋白濃度的測定
        2.4.5 分支酶的純化及酶學性質分析
    2.5 改性淀粉的制備工藝及理化性質分析
        2.5.1 單酶法制備改性淀粉的工藝
        2.5.2 雙酶法制備改性淀粉的工藝
        2.5.3 體外消化性能分析
        2.5.4 高效陰離子交換色譜分析
        2.5.5 高效凝膠過濾色譜分析
        2.5.6 質子核磁共振光譜學分析
第三章 結果與討論
    3.1 分支酶在E.coli中的克隆表達及酶學性質研究
        3.1.1 分支酶在E.coli中的克隆表達
        3.1.2 重組分支酶的純化
        3.1.3 重組分支酶的生化性質研究
        3.1.4 重組分支酶的底物特異性
    3.2 分支酶在淀粉改性中的應用條件研究及產物分析
        3.2.1 加酶量對分支酶在淀粉改性應用中的影響
        3.2.2 反應時間對分支酶在淀粉改性應用中的影響
        3.2.3 反應溫度對分支酶在淀粉改性應用中的影響
        3.2.4 反應pH對分支酶在淀粉改性應用中的影響
        3.2.5 淀粉改性產物高效陰離子交換色譜分析
        3.2.6 淀粉改性產物高效凝膠過濾色譜分析
        3.2.7 淀粉改性產物質子核磁共振光譜學分析
    3.3 雙酶復配制備改性淀粉及產物分析
        3.3.1 雙酶復配制備改性淀粉研究
        3.3.2 雙酶復配制備改性淀粉產物分析
    3.4 Vibrio vulnificus分支酶在B.subtilis中表達的研究
        3.4.1 Vibrio vulnificus分支酶在B.subtilis中的構建及表達
        3.4.2 不同啟動子對Vibrio vulnificus分支酶表達量的影響
        3.4.3 Vibrio vulnificus分支酶在B.subtilis WS11?hrc A中的表達
主要結論與展望
    主要結論
    展望
致謝
參考文獻
附錄:作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]生物酶解玉米淀粉和燕麥淀粉的消化性和回生性的研究[D]. 王玉娟.長春大學 2017
[3]木薯淀粉的化學改性及其衍生物的結構、性質和體外消化率的研究[D]. 梅既強.合肥工業(yè)大學 2016
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本文編號：3716330