天然淀粉中抗性淀粉（RS）含量較低,大量攝入可引發(fā)代謝綜合相關(guān)疾病,通過酶法改性得到的改性淀粉中RS含量有所提高,對(duì)人類生理健康具有極大益處。分支酶（branching enzyme）包括淀粉分支酶和糖原分支酶兩大類,它能催化α-1,4鍵的斷裂,形成α-1,6分支點(diǎn),在改性淀粉制備中具有巨大應(yīng)用潛能。本文對(duì)直鏈淀粉親和性高且來源于Rhodothemus obamensis的淀粉分支酶（RoBE）和對(duì)支鏈淀粉親和性高且來源于Vibrio vulnificus的糖原分支酶（VvGBE）在Escherichia coli BL21（DE3）中表達(dá),研究它們的酶學(xué)性質(zhì)及底物特異性,探究了制備改性淀粉的工藝條件,對(duì)改性淀粉產(chǎn)物的理化性質(zhì)進(jìn)行了分析。此外,將VvGBE在Bacillus subtilis WS11中進(jìn)行表達(dá),探索了啟動(dòng)子對(duì)其表達(dá)量的影響。主要研究結(jié)果如下:（1）將Vibrio vulnificus和Rhodothemus obamensis來源的分支酶基因在E.coli BL21（DE3）中表達(dá),經(jīng)搖瓶發(fā)酵,它們對(duì)支鏈淀粉的胞內(nèi)酶活分別為2.06 U·mL^-1... 

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 淀粉的概述
        1.1.1 淀粉消化性分類
        1.1.2 改性淀粉的功能
        1.1.3 淀粉改性的方法
    1.2 分支酶的概述
        1.2.1 分支酶的來源及性質(zhì)
        1.2.2 分支酶在改性淀粉制備中的應(yīng)用
    1.3 大腸桿菌和枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的概述
        1.3.1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的簡(jiǎn)介
        1.3.2 枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的簡(jiǎn)介
    1.4 立題依據(jù)及意義
    1.5 本論文的研究?jī)?nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌種與質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要培養(yǎng)基
    2.2 分子生物學(xué)操作方法
        2.2.1 重組E.coli質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 重組B.subtilis質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 不同啟動(dòng)子表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 E.coli感受態(tài)的制備及熱激法轉(zhuǎn)化
        2.2.5 B.subtilis感受態(tài)的制備及電擊法轉(zhuǎn)化
    2.3 發(fā)酵方法
        2.3.1 重組E.coli的搖瓶發(fā)酵
        2.3.2 重組B.subtilis的搖瓶發(fā)酵
    2.4 分析方法
        2.4.1 菌體濃度的測(cè)定
        2.4.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳分析
        2.4.3 分支酶酶活的測(cè)定
        2.4.4 蛋白濃度的測(cè)定
        2.4.5 分支酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)分析
    2.5 改性淀粉的制備工藝及理化性質(zhì)分析
        2.5.1 單酶法制備改性淀粉的工藝
        2.5.2 雙酶法制備改性淀粉的工藝
        2.5.3 體外消化性能分析
        2.5.4 高效陰離子交換色譜分析
        2.5.5 高效凝膠過濾色譜分析
        2.5.6 質(zhì)子核磁共振光譜學(xué)分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 分支酶在E.coli中的克隆表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究
        3.1.1 分支酶在E.coli中的克隆表達(dá)
        3.1.2 重組分支酶的純化
        3.1.3 重組分支酶的生化性質(zhì)研究
        3.1.4 重組分支酶的底物特異性
    3.2 分支酶在淀粉改性中的應(yīng)用條件研究及產(chǎn)物分析
        3.2.1 加酶量對(duì)分支酶在淀粉改性應(yīng)用中的影響
        3.2.2 反應(yīng)時(shí)間對(duì)分支酶在淀粉改性應(yīng)用中的影響
        3.2.3 反應(yīng)溫度對(duì)分支酶在淀粉改性應(yīng)用中的影響
        3.2.4 反應(yīng)pH對(duì)分支酶在淀粉改性應(yīng)用中的影響
        3.2.5 淀粉改性產(chǎn)物高效陰離子交換色譜分析
        3.2.6 淀粉改性產(chǎn)物高效凝膠過濾色譜分析
        3.2.7 淀粉改性產(chǎn)物質(zhì)子核磁共振光譜學(xué)分析
    3.3 雙酶復(fù)配制備改性淀粉及產(chǎn)物分析
        3.3.1 雙酶復(fù)配制備改性淀粉研究
        3.3.2 雙酶復(fù)配制備改性淀粉產(chǎn)物分析
    3.4 Vibrio vulnificus分支酶在B.subtilis中表達(dá)的研究
        3.4.1 Vibrio vulnificus分支酶在B.subtilis中的構(gòu)建及表達(dá)
        3.4.2 不同啟動(dòng)子對(duì)Vibrio vulnificus分支酶表達(dá)量的影響
        3.4.3 Vibrio vulnificus分支酶在B.subtilis WS11?hrc A中的表達(dá)
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄:作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]生物酶解玉米淀粉和燕麥淀粉的消化性和回生性的研究[D]. 王玉娟.長(zhǎng)春大學(xué) 2017
[3]木薯淀粉的化學(xué)改性及其衍生物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和體外消化率的研究[D]. 梅既強(qiáng).合肥工業(yè)大學(xué) 2016
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本文編號(hào)：3716330