發(fā)布時間：2022-02-10 08:04

　　通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)人Cu,Zn-SOD具有產(chǎn)量高,活性穩(wěn)定,純度高的優(yōu)點,且避免了Cu,Zn-SOD異源蛋白排斥的免疫性過敏反應(yīng),解決了從血液中提取Cu,Zn-SOD的排異問題。對Cu,Zn-SOD的工業(yè)生產(chǎn)和在醫(yī)療、生化品及食品中的應(yīng)用具有重大的意義。本研究旨在利用基因工程的方法,構(gòu)建人Cu,Zn-SOD的原核表達工程菌和真核表達工程菌,分別優(yōu)化其發(fā)酵條件以提高表達量和酶活性,并對兩種表達工程菌進行比對和分析,以利于后續(xù)的研究和生產(chǎn)。本研究根據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性對人Cu,Zn-SOD的核苷酸序列改造并人工合成,將其與質(zhì)粒pET-22b（+）結(jié)合構(gòu)建表達載體,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21（DE3）中,以IPTG誘導(dǎo)實現(xiàn)分泌表達,并進一步對其發(fā)酵條件進行優(yōu)化以提高表達量和蛋白活性。根據(jù)釀酒酵母密碼子偏好性對人Cu,Zn-SOD的核苷酸序列改造并人工合成,將其與質(zhì)粒pAUR123結(jié)合構(gòu)建表達載體,轉(zhuǎn)化入釀酒酵母中,并進一步對其發(fā)酵條件進行優(yōu)化以提高表達量和蛋白活性。通過運用工程菌的優(yōu)勢密碼子對外源目的基因進行改造,提高工程菌異源表達量,充分發(fā)揮各自的優(yōu)勢,挖掘大腸桿菌和釀酒酵母作為異源表達工... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線

Cu,Zn-SOD活性中心結(jié)構(gòu)

圖 1.2 人 Cu, Zn-SOD 三級結(jié)構(gòu)Cu, Zn-SOD 的活性中心像一個橢圓形口袋的形狀，銅離子位于口水分子和 4 個組氨酸形成配位，靠近溶劑面，參與酶的催化反應(yīng)，天冬氨酸和三個組氨酸配位，包埋于疏水基團中，維持和穩(wěn)定酶的

【參考文獻】：
期刊論文
[1]超氧化物歧化酶重組酵母的構(gòu)建及其發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 張海玲,劉超,程欲,孫金鈺,鄭屹峰,傅婷,趙丹,劉樹滔,饒平凡.  食品與生物技術(shù)學(xué)報. 2017(09)
[2]絲瓜超氧化物歧化酶（SOD）酶學(xué)特性的研究[J]. 張前榮,莊尹宏,溫慶放,劉建汀,朱海生.  分子植物育種. 2017(08)
[3]微生物發(fā)酵提高SOD產(chǎn)率的研究進展[J]. 時桂芹,周文珊,任菲.  中國生物工程雜志. 2017(04)
[4]長春花密碼子使用偏好性分析[J]. 李瀅,匡雪君,朱孝軒,朱英杰,孫超.  中國中藥雜志. 2016(22)
[5]高效hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表達及其穿膜功能的研究[J]. 王曉勛,杞少華,李瑞明,梁清樂.  分子診斷與治療雜志. 2016(02)
[6]人參DS和D12H基因的異源共表達[J]. 王雪松,李躬軍,趙壽經(jīng),安巖,曲慶玲,盧超.  吉林大學(xué)學(xué)報(工學(xué)版). 2016(04)
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[9]pET 22b-TP17表達載體的構(gòu)建與鑒定[J]. 李佳凌,李尹鳳,湯軍,蔡延森.  瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2014(03)
[10]氧化自由基清除劑超氧化物歧化酶與疾病[J]. 張笑天,鄭曉瑛.  中國公共衛(wèi)生. 2014(10)

博士論文
[1]重組PTD-Cu/Zn SOD的構(gòu)建及其對心肌損傷的保護作用研究[D]. 劉菊英.武漢大學(xué) 2013

碩士論文
[1]人Cu，Zn-SOD工程酶在畢赤酵母中的表達研究[D]. 杜姍姍.吉林大學(xué) 2006



本文編號：3618545