發(fā)布時(shí)間：2021-12-16 17:20

　　本論文針對(duì)門冬酰胺酶生產(chǎn)菌小規(guī)模生產(chǎn)過程中不穩(wěn)定的問題,對(duì)歐文氏菌進(jìn)行復(fù)壯篩選,并對(duì)放大至5000 L罐規(guī)模的系列問題進(jìn)行研究和探索,實(shí)現(xiàn)門冬酰胺酶發(fā)酵工藝的優(yōu)化。研究結(jié)果如下:1、通過紫外線+LiCl復(fù)合誘變法復(fù)壯篩選出3株產(chǎn)酶能力強(qiáng)、性狀穩(wěn)定的歐文氏菌突變株,其中產(chǎn)酶能力最強(qiáng)的FZ-1-15號(hào)菌株搖瓶發(fā)酵門冬酰胺酶的效價(jià)為34.9IU/mL,比出發(fā)菌株提高了 56.5%。2、通過碳源、氮源、復(fù)合氮源和無機(jī)鹽等單因素試驗(yàn)、Plackett-Burman和響應(yīng)面分析法優(yōu)化研究,得出最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方:胰蛋白胨2.2%+谷氨酸鈉2.1%+玉米漿2%+酵母粉0.5%+NaC10.5%,pH7.0;培養(yǎng)基滅菌方式采用121℃、30min濕消。通過三角瓶改良和搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)試驗(yàn),確定了一級(jí)生產(chǎn)種子培養(yǎng)的關(guān)鍵工藝控制參數(shù):培養(yǎng)溫度為37 ℃,1000mL搖瓶的培養(yǎng)基裝量為250 mL,接種量為1.5%,搖床轉(zhuǎn)速為220 r/min,培養(yǎng)周期為18 h。試驗(yàn)證明剪切力對(duì)發(fā)酵有顯著的負(fù)面影響,在工藝控制中應(yīng)通過調(diào)控通風(fēng)量和罐壓力等手段減少剪切力的影響因素。3、在50 L智能發(fā)酵罐上進(jìn)行了復(fù)壯菌株FZ-... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１紫外線誘變劑量與歐文氏菌存活率曲線??Ｆｉｕｒｅ?２－１?ＵＶ?ｍｕｔａｅｎｉｃ?ｄｏｓｅ?ａｎｄ?Ｅｒｗｉｎｉａ?ｖｉａｂｉｌｉｔｃｕｒｖｅ??

??第二章門冬酰胺酶生產(chǎn)菌種復(fù)壯及發(fā)酵工藝的優(yōu)化?２．?３．?１．２復(fù)壯菌株的生長與產(chǎn)率??按照２．２．３．６的方法１）對(duì)保藏的歐文氏菌出發(fā)菌株（編號(hào)：ＯＺ２８－３）進(jìn)行紫外線射復(fù)壯試驗(yàn)（按上一步驟選定的紫外線照射時(shí)間為ｌ〇５ｓ），先挑�。保埃皞�(gè)較大的菌落，用門冬酰胺酶酶活快速測(cè)定方法進(jìn)行顯色反應(yīng)，從中選出２０株顯色反應(yīng)中呈深棕紅的突變株進(jìn)行復(fù)篩，篩選出３株酶效價(jià)較高的菌株（分別編號(hào)為：ＦＺ－１－０８，?ＦＺ－１－１５，??ＦＺ－１－１７）。誘變篩選出的３株菌株與出發(fā)菌株（ＯＺ２８－３）進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，測(cè)定培養(yǎng)液??的效價(jià)和〇Ｄ５〇〇。結(jié)果如圖２－２所示。??

?試驗(yàn)結(jié)果得出，１０００?ｍＬ改良三角瓶搖瓶發(fā)酵門冬酰胺酶的效價(jià)達(dá)３９．４３?ＩＵ／ｍＬ，??比５００ｍＬ普通三角瓶提高了?１２．０２％。從圖２－４可看出，經(jīng)過特制加工改良后的三角瓶??發(fā)酵培養(yǎng)門冬酰胺酶的效價(jià)明顯提高，這可能是改良后１０００ｍＬ三角瓶的內(nèi)凹形擋板起??到了類似攪拌槳的作用所致，在搖床震蕩過程中阻止培養(yǎng)基形成漩渦，擊打培養(yǎng)液形成??了許多小氣泡，增加了搖瓶培養(yǎng)基的溶氧率。??２．?３．?３發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化??２．?３．?３．?１不同碳源對(duì)復(fù)壯菌株ＦＺ－１－１５產(chǎn)酶的影響??發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中以４％的胰蛋白胨為氮源，加入葡萄糖、可溶性淀粉、蔗糖和甘??油等碳源，按２．２．３．８的方法１）進(jìn)行不同碳源的１〇〇〇?ｍＬ搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)試驗(yàn)，測(cè)定培養(yǎng)??液的〇Ｄ５（Ｋ）、效價(jià)和ｐＨ值。每個(gè)實(shí)驗(yàn)做３個(gè)平行

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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