人α-半乳糖苷酶（Humanα-Galactosidase A,α-Gal A）是由人X染色體上GALA基因編碼的溶酶體糖蛋白水解酶,負(fù)責(zé)水解溶酶體里面的寡聚糖、糖脂、糖肽末端的α-半乳糖殘基。α-Gal A缺乏導(dǎo)致神經(jīng)酰胺三己糖苷（Ceramide trihexoside,GL3）在人體各組織中積累,最終誘發(fā)法布雷病。作為一種X染色體連鎖遺傳性溶酶體貯積病,法布雷病臨床癥狀主要表現(xiàn)為青年腦卒中、左心室肥大等,嚴(yán)重威脅人類健康。目前,酶替代療法（Enzyme replacement therapy,ERT）是治療法布雷病最有效的方法,已批準(zhǔn)上市的α-Gal A分別是由中國倉鼠卵巢細(xì)胞和人成纖維細(xì)胞表達(dá)的。然而,由于當(dāng)前的α-Gal A表達(dá)體系表達(dá)量低、成本高,導(dǎo)致法布雷病患者的治療費(fèi)用高昂,無法滿足法布雷患者的需求。因此,尋找安全可靠的表達(dá)體系以制備足夠的α-Gal A用于法布雷病的治療迫在眉睫。里氏木霉（Trichoderma reesei,T.reesei,RUT-C30）是無性型紅褐肉座菌屬嗜溫絲狀真菌,具有較好的蛋白合成和分泌能力,具有真核細(xì)胞的分泌機(jī)制,并且其N糖基化和高甘露... 

【文章來源】：廣東工業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

UPR和ERAD相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平(x—±s,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001)

第三章人α-半乳糖苷酶在里氏木霉中的表達(dá)55圖3-10UPR和ERAD相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平(x—±s,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001)Figure3-10UPRandERAD-relatedgenestranscript(x—±s,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001)圖3-11所示為絲狀真菌在表達(dá)蛋白時(shí)所涉及的分泌途徑及其成分和改善蛋白表達(dá)的基因工程策略[16]。目的基因經(jīng)過優(yōu)化改造后轉(zhuǎn)化到里氏木霉中，在核糖體上轉(zhuǎn)錄，當(dāng)目的基因的信號肽mRNA合成并暴露在核糖體表面時(shí)，信號肽識別顆粒(Signalpeptiderecognitionparticle,SRP)與mRNA-核糖體-新生肽鏈結(jié)合，靶向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)表面的SEC61蛋白受體后SRP解離，蛋白翻譯繼續(xù)進(jìn)行[52]。當(dāng)新生肽段進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔時(shí)，Hsp70家族的蛋白分子伴侶如免疫球蛋白結(jié)合蛋白Bip和二硫鍵異構(gòu)酶Pdi在協(xié)助目的蛋白正確折疊、修飾并轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體中進(jìn)一步的修飾加工[53]，然后在各種囊泡融合或者質(zhì)膜融合轉(zhuǎn)錄因子(sar1、ypt1、nsf1、snc1、ftt1/2等)[54]的轉(zhuǎn)錄調(diào)控下將目的蛋白運(yùn)輸分泌到胞外。但新生肽段也有發(fā)生錯(cuò)誤折疊的情況，錯(cuò)誤折疊的肽段在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中積累，誘導(dǎo)Hac1轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的表達(dá)[55]，從而會激發(fā)UPR


本文編號：3517626