藥用輔料環(huán)糊精（CDs）是含有親水性外部和疏水中心腔的環(huán)狀低聚糖,由于它們具有能夠與許多難溶的親脂性分子形成水溶性包合物的獨特優(yōu)勢,故被廣泛應(yīng)用于制藥、紡織、農(nóng)業(yè)、化妝品、化學(xué)和食品工業(yè)等領(lǐng)域。CDs一般由淀粉或淀粉衍生物經(jīng)環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶（CGTase,EC 2.4.1.19）催化合成。CGTase屬于α-淀粉酶家族,能催化四種反應(yīng):環(huán)化、偶聯(lián)、歧化和水解,其中環(huán)化反應(yīng)產(chǎn)生CDs是CGTase的特征反應(yīng),即CGTase催化淀粉的α-糖苷鍵裂解,一部分供體被分離出來作為受體以形成CDs。CGTase催化淀粉合成CDs,其產(chǎn)物通常以α-,β-和γ-CD的混合物形式存在（分別具有6、7和8個葡萄糖單元）,這不利于CDs的分離純化。因此,提高催化產(chǎn)物的專一性對具體種類環(huán)糊精的實際生產(chǎn)具有重要意義,即產(chǎn)物特異性。近年來提高環(huán)糊精的產(chǎn)物特異性一直是研究熱點,主要有向反應(yīng)體系中添加有機(jī)溶劑、對CGTase分子改造兩種手段。本文基于來自Bacillus cereus的高效表達(dá)β-CGTase的工程菌,圍繞提高其酶法合成CDs的產(chǎn)物特異性展開了一系列研究,建立了一種簡便、高效、高選擇性地合成CDs的方... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CGTase催化的四種反應(yīng)的示意圖

圖 2.1 CDs合成工藝的優(yōu)化思路Fig 2.1 Optimization of CDs synthesis process.2.3.2 重組 β-CGTase 的表達(dá)種子培養(yǎng)：將 500μL 甘油保藏菌液按照 1%接種量添加到體積為 50mL 的 LB液體培養(yǎng)基中，并加入 0.1%體積分?jǐn)?shù)的 50μL Ampicillin 溶液，隨后放置于 37°C、220~250r/min 的生化搖床中過夜培養(yǎng) 16~18h（微生物的對數(shù)生長期）；富集培養(yǎng)：從種子培養(yǎng)液中按 1%接種量吸取 500μL 種子培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)接到含有 0.1%體積分?jǐn)?shù) Ampicillin 溶液的新鮮 LB培養(yǎng)基中，并置于 260 r/min、37°C條件下培養(yǎng)；誘導(dǎo)發(fā)酵：待菌液濃度 OD600數(shù)值達(dá)到 1.8~2.0 時（時間為 3.5h 左右），加入 500μL IPTG 溶液以誘導(dǎo)產(chǎn)酶，置于 25°C、220~250r/min 生化搖床中誘導(dǎo)大約4.5h；收集菌體：將誘導(dǎo)發(fā)酵得到的菌懸液分裝在離心管中，每只離心管對應(yīng)一瓶菌懸液，隨后于 0°C、8000r/min 下離心 12~15min，收集菌體沉淀；然后震蕩清洗，再次在 0°C、8000r/min 下離心 12~15min。此時若不立即破碎使用，需低溫

21圖 2.2 β-CD 標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2.2 The standard curve of β-CD standard samples.經(jīng) Origin 軟件線性分析可得 β-CD的峰面積（記作 Y，單位 mv）和濃度（記作 X，單位 mg/ml）在 β-CD 濃度是 4-40 mg/mL 的范圍內(nèi)展現(xiàn)良好的線性關(guān)系：Y＝175733+309700X（R＝0.99984）。外標(biāo)法測量 γ-CD：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同淀粉原料及前處理方法對β-環(huán)糊精生產(chǎn)的影響[J]. 楊鐘超,顧正彪,程力,洪雁.  食品與生物技術(shù)學(xué)報. 2009(05)
[2]改良Lowry法和Bradford法測定蚯蚓提取物中蛋白質(zhì)含量的比較（英文）[J]. 閆萍,楊琦,王惠珍,解軍,劉德文,牛勃.  山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2006(01)



本文編號：3517182