氨基酸廣泛存在于自然界之中,是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位,也是人類攝取的重要營養(yǎng)素之一,有D型和L型氨基酸兩種異構(gòu)體,它們在生物體內(nèi)發(fā)揮著不同的生理功能。D-對羥基苯甘氨酸可用于合成β-內(nèi)酰胺類半合成抗生素,D-纈氨酸是一種重要的有機(jī)手性源,主要應(yīng)用于手性藥物、添加劑等領(lǐng)域。本文將探索兩種D-氨基酸的酶法生產(chǎn)工藝,為工業(yè)化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。本文首先構(gòu)建兩種海因消旋酶工程菌,其一為從紅球菌R04中克隆得到,通過在NCBI網(wǎng)站GenBank中進(jìn)行序列比對確定該基因為一個新基因;其次對兩種D-氨基酸生產(chǎn)工藝進(jìn)行優(yōu)化,工程菌HC01發(fā)酵過程中選用玉米漿培養(yǎng)基培養(yǎng),其表達(dá)N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶（CAB）的比活力是LB（安琪）培養(yǎng)基的0.6722倍,是LB（Oxide）培養(yǎng)基的1.1860倍,培養(yǎng)基成本分別降低1.33元/L和4.97元/L,D-對羥基苯甘氨酸提取過程中加入適量活性炭可去除反應(yīng)液顏色,簡化了提取步驟,新工藝降低了培養(yǎng)基成本,減少了酸用量、廢水排放量等,為工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論基礎(chǔ);在D-纈氨酸轉(zhuǎn)化過程中使用上述兩種海因消旋酶基因工程菌,結(jié)果表明當(dāng)以DL-5’-異丙基海因作為底物時... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pRSET-hyu1表達(dá)Fig.2.5RecombinantplasmidPRSET-hyu1expression

圖 2.7 重組質(zhì)粒 pMAL-s-hyu2 表達(dá)Fig. 2.7 Recombinant plasmid pMAL-s-hyu2 expression3)未誘導(dǎo) ；2.pMAL- s/BL21(DE3)誘導(dǎo) ；3.pMAL-s--s-hyu2/BL21(DE3)誘導(dǎo)全菌；5.pMAL-s-hyu2/BL21(D

圖 2.6 重組質(zhì)粒 pRSET-hyu1 不同溫度表達(dá)情況xpression of recombinant plasmid PRSET-hyu1 at different temperL21(DE3)16℃表達(dá)全菌、上清、沉淀；4-6. pRSET-hyu1/BL21清、沉淀；7-9.pRSET-hyu1/BL21(DE3)37℃表達(dá)全菌、上清、

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]玉米漿在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用及研究進(jìn)展[J]. 王婷,張德志,蔡檸勻,陳寧,徐慶陽.  發(fā)酵科技通訊. 2018(04)
[2]2,3-吡啶二甲酰亞胺及其工程菌轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的高效液相色譜檢測[J]. 鈕利喜,馬師師.  色譜. 2018(04)
[3]新型扁桃酸消旋酶的基因挖掘和性能表征[J]. 周茂志,唐存多,許建和,郁惠蕾.  生物工程學(xué)報. 2018(06)
[4]玉米漿對大腸桿菌JH-B22發(fā)酵產(chǎn)L-丙氨酸的影響[J]. 劉棗,付相敏,潘海亮,王金華,王永澤.  化學(xué)與生物工程. 2017(11)
[5]利用重組大腸桿菌發(fā)酵甘油合成L-丙氨酸[J]. 周麗,鄧璨,崔文璟,劉中美,周哲敏.  現(xiàn)代食品科技. 2016(06)
[6]不同預(yù)處理方式的玉米漿應(yīng)用于L-蘇氨酸發(fā)酵的研究[J]. 牛福華,張安紅,常立群,徐慶陽.  發(fā)酵科技通訊. 2015(03)
[7]玉米漿中金屬離子對三孢布拉霉發(fā)酵生產(chǎn)β-胡蘿卜素的影響[J]. 向夢雄,閆興,王常高,杜馨,林建國,蔡俊.  中國釀造. 2014(11)
[8]玉米漿在氨基酸發(fā)酵工業(yè)中的作用[J]. 左瑩,張萍,張惠.  中國釀造. 2013(11)
[9]紅酵母利用玉米漿發(fā)酵產(chǎn)富含類胡蘿卜素功能飼料的研究[J]. 徐凱,趙筱,王金華,王永澤,李超.  飼料工業(yè). 2013(01)
[10]重組大腸桿菌利用不同培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)琥珀酸的研究[J]. 華渤文,趙錦芳,王金華,肖子康,趙筱.  食品工業(yè)科技. 2013(06)

博士論文
[1]工程菌生物轉(zhuǎn)化D-氨基酸及其相關(guān)酶的研究[D]. 鈕利喜.山西大學(xué) 2007

碩士論文
[1]不對稱轉(zhuǎn)化法制備D-組氨酸和D-苯甘氨酸的工藝研究[D]. 陶影.南昌大學(xué) 2006



本文編號：3470516