肝纖維化（liver fibrosis）是由病毒性肝炎、膽汁淤積、非酒精性脂肪肝炎等慢性肝臟疾病過程中細(xì)胞外基質(zhì)的過度積累導(dǎo)致的,晚期肝纖維化會導(dǎo)致肝硬化、肝衰竭、門靜脈高壓等疾病,嚴(yán)重威脅患者生命健康。肝纖維化病理機(jī)制復(fù)雜,目前尚無療效明確的藥物可供臨床應(yīng)用。天然產(chǎn)物能通過多靶點(diǎn)治療肝纖維化,已成為近年來防治肝纖維化研究的熱點(diǎn)。人工培養(yǎng)基培養(yǎng)的蛹蟲草稱為蟲草花。蛹蟲草多糖具有抗氧化、降血糖、抗病毒等生物活性,相比蛹蟲草,蟲草花價(jià)格低廉,且多糖含量更高,因此可能具有更高的利用價(jià)值。本文以蟲草花為原料,探究其最佳提取工藝,并通過體內(nèi)研究探究其對小鼠肝纖維化的作用與機(jī)制。本研究通過水提醇沉法提取粗多糖,利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化多糖提取工藝,通過Sevag法除蛋白,得到純度為95.61%的蟲草花多糖;以C57BL/6J小鼠為研究對象,采用四氯化碳（CCl₄）誘導(dǎo)肝纖維化動物模型,給予蟲草花多糖喂食,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后提取小鼠血清和肝臟組織研究蟲草花多糖對肝纖維化的作用及機(jī)制。通過本課題的完成,可以得到以下結(jié)論:（1）選取提取溫度、液料比、提取時(shí)間三個(gè)因素,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 肝纖維化的現(xiàn)狀
    1.2 肝纖維化的形成及發(fā)展
    1.3 肝纖維化發(fā)展過程中的細(xì)胞類型及作用
        1.3.1 肝星狀細(xì)胞
        1.3.2 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞
        1.3.3 肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞
        1.3.4 枯否細(xì)胞
        1.3.5 自然殺傷細(xì)胞和自然殺傷T細(xì)胞
        1.3.6 中性粒細(xì)胞
        1.3.7 T淋巴細(xì)胞
        1.3.8 B淋巴細(xì)胞
    1.4 肝纖維化過程中的細(xì)胞因子及信號通路
        1.4.1 核因子κB/瘤壞死因子α
        1.4.2 過氧化物酶體增殖物激活受體γ
        1.4.3 B淋巴細(xì)胞瘤-2/BAX信號通路
        1.4.4 膠原蛋白家族
        1.4.5 TGF-β1/Smad信號通路
    1.5 天然產(chǎn)物對肝纖維化的作用及機(jī)制
        1.5.1 抑制肝損傷
        1.5.2 抑制炎癥
        1.5.3 調(diào)控HSCs
            1.5.3.1 抑制HSCs活化
            1.5.3.2 抑制HSCs增殖
            1.5.3.3 促進(jìn)HSCs凋亡
    1.6 冬蟲夏草、蛹蟲草與蟲草花
    1.7 選題依據(jù)
第二章 實(shí)驗(yàn)材料及方法
    2.1 蟲草花多糖提取工藝優(yōu)化及提純
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.4.1 蟲草花粗多糖的提取工藝
            2.1.4.2 多糖得率測定
            2.1.4.3 水提蟲草花多糖單因素實(shí)驗(yàn)
            2.1.4.4 響應(yīng)面法優(yōu)化蟲草花多糖提取條件
            2.1.4.5 數(shù)據(jù)處理
    2.2 蟲草花粗多糖提純
        2.2.1 蟲草花多糖總糖含量的測定
        2.2.2 總蛋白含量的測定
    2.3 蟲草花多糖抑制肝纖維化的體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.3.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.3.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3.5 細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.5.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.3.5.2 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
            2.3.5.3 細(xì)胞凍存
            2.3.5.4 MTT法測蟲草花多糖的細(xì)胞毒性
            2.3.5.5 實(shí)驗(yàn)動物的給藥處理
            2.3.5.6 小鼠血清樣本提取及分析
            2.3.5.7 小鼠肝臟組織獲取
            2.3.5.8 小鼠肝臟石蠟切片制作
            2.3.5.9 H&E染色
            2.3.5.10 天狼星紅染色
            2.3.5.11 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)實(shí)驗(yàn)
            2.3.5.12 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,q-PCR)
            2.3.5.13 數(shù)據(jù)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 蟲草花多糖提取工藝優(yōu)化及粗多糖純化
        3.1.1 蟲草花多糖得率單因素實(shí)驗(yàn)
            3.1.1.1 提取溫度對蟲草花多糖得率的影響
            3.1.1.2 液料比對蟲草花多糖得率的影響
            3.1.1.3 提取時(shí)間對蟲草花多糖得率的影響
        3.1.2 響應(yīng)面法優(yōu)化蟲草花多糖提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1.2.1 回歸方差分析
            3.1.2.2 響應(yīng)面分析
            3.1.2.3 蟲草花多糖提取工藝優(yōu)化
            3.1.2.4 驗(yàn)證蟲草花多糖提取最佳工藝
        3.1.3 蟲草花多糖提純結(jié)果
    3.2 蟲草花多糖對于人源肝細(xì)胞LO2無顯著細(xì)胞毒性
    3.3 蟲草花多糖抑制CCl_4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化
        3.3.1 蟲草花多糖對CCl_4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠癥狀的影響
        3.3.2 蟲草花多糖改善肝纖維化小鼠體征
        3.3.3 蟲草花多糖降低小鼠肝纖維化水平
        3.3.4 蟲草花多糖通過抑制炎癥改善小鼠肝纖維化
        3.3.5 蟲草花多糖通過BCL-2/BAX信號通路抑制小鼠肝纖維化
第四章 討論與結(jié)論
    4.1 結(jié)果討論
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動及成果情況



本文編號：3442483