不同來源的絲膠蛋白對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎口服治療效果及機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-09-06 04:38
潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis,UC）是一種慢性的、非特異性反復(fù)發(fā)作的腸道疾病,主要發(fā)生于大腸。近年來,隨著我國(guó)人民生活水平的提高,UC發(fā)病率逐漸升高,成為世界難治性疾病之一。UC患者通常表現(xiàn)出許多臨床癥狀,如腹痛、腹瀉、體重減輕和便血等,嚴(yán)重威脅著公眾健康。它被認(rèn)為是由多種因素（包括遺傳因素,飲食、環(huán)境和微生物因素等）引起的,其特點(diǎn)是上皮屏障損壞、炎癥穩(wěn)態(tài)失衡和活性氧的大量蓄積。因此,UC的完全治愈不僅需要緩解炎癥,還需要修復(fù)受損的結(jié)腸黏膜。到目前為止,UC治療主要局限于通過使用消炎藥或免疫抑制劑來降低炎癥程度。盡管這些藥物有治療UC的效果,但它們的進(jìn)一應(yīng)用受到限制,因?yàn)樗鼈儗?duì)免疫系統(tǒng)的非特異性作用,導(dǎo)致短期和長(zhǎng)期毒副作用,如過敏反應(yīng),惡心,肝臟功能指標(biāo)升高,胰腺炎和其他危及生命的副作用。此外,局部活躍且全身吸收最少的抗炎藥物（5-氨基水楊酸）需要頻繁的高劑量給藥,以發(fā)揮可觀的臨床療效。因此UC的治療迫切需要具有粘膜愈合、抗炎和抗氧化作用等特性的新療法。蠶絲,是熟蠶結(jié)繭時(shí)分泌絲液凝固而成的連續(xù)長(zhǎng)纖維,也稱“天然絲”。它與羊毛一樣,是人類最早利用的動(dòng)物纖維之一。蠶絲...
【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
mg/mL的家蠶絲膠（SS）、柞蠶絲膠（TS）和蓖麻蠶絲膠（CSS）溶液的紫外可見吸收光譜
西南大學(xué)碩士學(xué)位論文202.4.2家蠶、柞蠶和蓖麻蠶絲膠蛋白的細(xì)胞毒性圖2-2家蠶絲膠、柞蠶絲膠和蓖麻蠶絲膠的體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)。Caco2細(xì)胞與SS,TS和CSS共孵育24h（a）和48h（b）的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；Raw264.7細(xì)胞與SS,TS和CSS共孵育24h（c）和48h（d）的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。Figure2.2InvitrotoxicitytestsofSS,TSandCSSagainstCaco2cellsfor24h(a)and48h(b)andRaw264.7cellsfor24h(c)and48h(d)byMTTassay.Eachpointrepresentsthemean±S.E.M.(n=5).由于結(jié)腸上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是與UC治療相關(guān)的兩種靶細(xì)胞[106]。在以下體外實(shí)驗(yàn)中選擇了Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞。我們通過MTT比色法測(cè)試了三種絲膠對(duì)Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性。首先我們用SS、TS和CSS溶液處理Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞和48h，并進(jìn)一步評(píng)估其相應(yīng)的細(xì)胞活力。很明顯（圖2-2c和d），在三種絲膠與Caco2細(xì)胞孵育24h后，所有實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的存活率都在80%以上（我們一般認(rèn)為細(xì)胞存活率大于80%，藥物具很好的生物相容性），表現(xiàn)出良好的細(xì)胞相容性。即使三種絲膠與Caco2細(xì)胞孵育48h后，我們也沒有觀察到其對(duì)細(xì)胞具有明顯的毒性。另外，當(dāng)SS濃度為200μg/mL時(shí)，不管三種絲膠與Raw264.7細(xì)胞共孵育24h還是48h，SS對(duì)Raw264.7細(xì)胞（圖2-2a和b）殺傷率均小于20%，具有更好的生物安全性，而TS和CSS組對(duì)Raw264.7細(xì)胞存在明顯的細(xì)胞毒性�？傊号cTS和CSS相比，SS分子在結(jié)腸細(xì)胞中具有更好的生物相容性。除了細(xì)胞毒性研究外，有研究表明，絲膠可以作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基的補(bǔ)充，驗(yàn)證了其良好的體外生物相容性[107，108]。
第2章不同來源絲膠蛋白的制備及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)212.4.3家蠶、柞蠶和蓖麻蠶絲膠蛋白的細(xì)胞攝取情況圖2-3（a）用FITC-SS處理不同時(shí)間點(diǎn)（0、1、2和4h）后，Caco2細(xì)胞對(duì)SS的吞噬情況的熒光成像；（b）用FITC-SS、FITC-TS和FITC-CSS分別處理4h后，Caco2細(xì)胞對(duì)SS、TS和CSS的吞噬情況的熒光成像；（c）FCM吞噬效率直方圖反應(yīng)了SS、TS和CSS分別處理Caco2細(xì)胞0、1、2和4h后細(xì)胞對(duì)藥物的吞噬情況；（d）FCM吞噬效率直方圖反應(yīng)了SS、TS和CSS分別處理Caco2細(xì)胞0、1、2和4h后細(xì)胞對(duì)藥物的吞噬情況。Figure2.3(a)CellularuptakeprofilesofSSinCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SSfor0,1,2,and4h,respectively;(b)CellularuptakeprofilesofSS,TSandCSSinCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SS,FITC-TSandFITC-CSSfor4h,respectively;Afterincubation,cellswereprocessedforfluorescencestaining.FixedcellswerestainedwithDAPIforvisualizationofnuclei(blue),Rhodamineconjugatedphalloidinforvisualizationofcytoskeleton,andFITCconjugatedSS,TSandCSSwereobservedinFITCchannel.Scalebarrepresents20μm.(c)FCManalysisand(d)MFIofCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SS,FITC-TSandFITC-CSSfor4h,respectively.Scalebarrepresents20μm.Eachpointrepresentsthemean±SEM(n=3).為了考察絲膠是否可以被Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞有效吞噬，我們首先使用CLSM通過可視化方式觀察了三種絲膠被細(xì)胞的攝取情況。用含F(xiàn)ITC-SS的
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SS/PNIPAm互穿網(wǎng)絡(luò)水凝膠的合成及其改性棉纖維的結(jié)構(gòu)與熱性能研究[J]. 崔一帆,閆俊,路艷華,程德紅. 印染助劑. 2019(04)
[2]絲膠蛋白的結(jié)構(gòu)、性能及生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用[J]. 肖肖,陳昌盛,劉偉強(qiáng),張業(yè)順. 化學(xué)進(jìn)展. 2017(05)
[3]潰瘍性結(jié)腸炎腸黏膜屏障損傷機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 張俊,王朋川,李貴軻,魏永凱,杜雯雯,趙健鋌,劉衡,楊志斌. 廣州化工. 2017(08)
[4]蠶絲天然絲膠蛋白的紫外吸收能力研究[J]. 陳復(fù)生,葉崇軍,魏兆軍. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2013(03)
[5]Key factors in developing the trinitrobenzene sulfonic acid-induced post-inflammatory irritable bowel syndrome model in rats[J]. Justin CY Wu,Brian M Berman,Joseph JY Sung. World Journal of Gastroenterology. 2012(20)
[6]絲膠改性纖維的研究進(jìn)展[J]. 周洪榮. 化纖與紡織技術(shù). 2011(03)
[7]家蠶絲蛋白生物材料新功能的開發(fā)及應(yīng)用[J]. 王玉軍,柳學(xué)廣,徐世清. 絲綢. 2006(06)
[8]蓖麻蠶繭絲蛋白質(zhì)的組成與結(jié)構(gòu)[J]. 盛家鏞. 國(guó)外農(nóng)學(xué)-蠶業(yè). 1990(02)
[9]柞蠶絲膠的構(gòu)造和溶解性研究[J]. 陳密. 紡織學(xué)報(bào). 1982(09)
博士論文
[1]絲膠蛋白水凝膠的制備及應(yīng)用研究[D]. 張業(yè)順.華中科技大學(xué) 2015
[2]腸上皮細(xì)胞緊密連接調(diào)節(jié)的研究[D]. 庾慶華.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
碩士論文
[1]用于潰瘍性結(jié)腸炎治療的載姜黃素微、納米口服給藥系統(tǒng)研究[D]. 司笑瑩.西南大學(xué) 2017
[2]野蠶繭絲的結(jié)構(gòu)與性能[D]. 董鳳春.蘇州大學(xué) 2006
本文編號(hào)：3386763
【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
mg/mL的家蠶絲膠（SS）、柞蠶絲膠（TS）和蓖麻蠶絲膠（CSS）溶液的紫外可見吸收光譜
西南大學(xué)碩士學(xué)位論文202.4.2家蠶、柞蠶和蓖麻蠶絲膠蛋白的細(xì)胞毒性圖2-2家蠶絲膠、柞蠶絲膠和蓖麻蠶絲膠的體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)。Caco2細(xì)胞與SS,TS和CSS共孵育24h（a）和48h（b）的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；Raw264.7細(xì)胞與SS,TS和CSS共孵育24h（c）和48h（d）的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。Figure2.2InvitrotoxicitytestsofSS,TSandCSSagainstCaco2cellsfor24h(a)and48h(b)andRaw264.7cellsfor24h(c)and48h(d)byMTTassay.Eachpointrepresentsthemean±S.E.M.(n=5).由于結(jié)腸上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是與UC治療相關(guān)的兩種靶細(xì)胞[106]。在以下體外實(shí)驗(yàn)中選擇了Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞。我們通過MTT比色法測(cè)試了三種絲膠對(duì)Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性。首先我們用SS、TS和CSS溶液處理Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞和48h，并進(jìn)一步評(píng)估其相應(yīng)的細(xì)胞活力。很明顯（圖2-2c和d），在三種絲膠與Caco2細(xì)胞孵育24h后，所有實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的存活率都在80%以上（我們一般認(rèn)為細(xì)胞存活率大于80%，藥物具很好的生物相容性），表現(xiàn)出良好的細(xì)胞相容性。即使三種絲膠與Caco2細(xì)胞孵育48h后，我們也沒有觀察到其對(duì)細(xì)胞具有明顯的毒性。另外，當(dāng)SS濃度為200μg/mL時(shí)，不管三種絲膠與Raw264.7細(xì)胞共孵育24h還是48h，SS對(duì)Raw264.7細(xì)胞（圖2-2a和b）殺傷率均小于20%，具有更好的生物安全性，而TS和CSS組對(duì)Raw264.7細(xì)胞存在明顯的細(xì)胞毒性�？傊号cTS和CSS相比，SS分子在結(jié)腸細(xì)胞中具有更好的生物相容性。除了細(xì)胞毒性研究外，有研究表明，絲膠可以作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基的補(bǔ)充，驗(yàn)證了其良好的體外生物相容性[107，108]。
第2章不同來源絲膠蛋白的制備及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)212.4.3家蠶、柞蠶和蓖麻蠶絲膠蛋白的細(xì)胞攝取情況圖2-3（a）用FITC-SS處理不同時(shí)間點(diǎn)（0、1、2和4h）后，Caco2細(xì)胞對(duì)SS的吞噬情況的熒光成像；（b）用FITC-SS、FITC-TS和FITC-CSS分別處理4h后，Caco2細(xì)胞對(duì)SS、TS和CSS的吞噬情況的熒光成像；（c）FCM吞噬效率直方圖反應(yīng)了SS、TS和CSS分別處理Caco2細(xì)胞0、1、2和4h后細(xì)胞對(duì)藥物的吞噬情況；（d）FCM吞噬效率直方圖反應(yīng)了SS、TS和CSS分別處理Caco2細(xì)胞0、1、2和4h后細(xì)胞對(duì)藥物的吞噬情況。Figure2.3(a)CellularuptakeprofilesofSSinCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SSfor0,1,2,and4h,respectively;(b)CellularuptakeprofilesofSS,TSandCSSinCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SS,FITC-TSandFITC-CSSfor4h,respectively;Afterincubation,cellswereprocessedforfluorescencestaining.FixedcellswerestainedwithDAPIforvisualizationofnuclei(blue),Rhodamineconjugatedphalloidinforvisualizationofcytoskeleton,andFITCconjugatedSS,TSandCSSwereobservedinFITCchannel.Scalebarrepresents20μm.(c)FCManalysisand(d)MFIofCaco2cellsaftertreatmentwithFITC-SS,FITC-TSandFITC-CSSfor4h,respectively.Scalebarrepresents20μm.Eachpointrepresentsthemean±SEM(n=3).為了考察絲膠是否可以被Caco2細(xì)胞和Raw264.7細(xì)胞有效吞噬，我們首先使用CLSM通過可視化方式觀察了三種絲膠被細(xì)胞的攝取情況。用含F(xiàn)ITC-SS的
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SS/PNIPAm互穿網(wǎng)絡(luò)水凝膠的合成及其改性棉纖維的結(jié)構(gòu)與熱性能研究[J]. 崔一帆,閆俊,路艷華,程德紅. 印染助劑. 2019(04)
[2]絲膠蛋白的結(jié)構(gòu)、性能及生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用[J]. 肖肖,陳昌盛,劉偉強(qiáng),張業(yè)順. 化學(xué)進(jìn)展. 2017(05)
[3]潰瘍性結(jié)腸炎腸黏膜屏障損傷機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 張俊,王朋川,李貴軻,魏永凱,杜雯雯,趙健鋌,劉衡,楊志斌. 廣州化工. 2017(08)
[4]蠶絲天然絲膠蛋白的紫外吸收能力研究[J]. 陳復(fù)生,葉崇軍,魏兆軍. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2013(03)
[5]Key factors in developing the trinitrobenzene sulfonic acid-induced post-inflammatory irritable bowel syndrome model in rats[J]. Justin CY Wu,Brian M Berman,Joseph JY Sung. World Journal of Gastroenterology. 2012(20)
[6]絲膠改性纖維的研究進(jìn)展[J]. 周洪榮. 化纖與紡織技術(shù). 2011(03)
[7]家蠶絲蛋白生物材料新功能的開發(fā)及應(yīng)用[J]. 王玉軍,柳學(xué)廣,徐世清. 絲綢. 2006(06)
[8]蓖麻蠶繭絲蛋白質(zhì)的組成與結(jié)構(gòu)[J]. 盛家鏞. 國(guó)外農(nóng)學(xué)-蠶業(yè). 1990(02)
[9]柞蠶絲膠的構(gòu)造和溶解性研究[J]. 陳密. 紡織學(xué)報(bào). 1982(09)
博士論文
[1]絲膠蛋白水凝膠的制備及應(yīng)用研究[D]. 張業(yè)順.華中科技大學(xué) 2015
[2]腸上皮細(xì)胞緊密連接調(diào)節(jié)的研究[D]. 庾慶華.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
碩士論文
[1]用于潰瘍性結(jié)腸炎治療的載姜黃素微、納米口服給藥系統(tǒng)研究[D]. 司笑瑩.西南大學(xué) 2017
[2]野蠶繭絲的結(jié)構(gòu)與性能[D]. 董鳳春.蘇州大學(xué) 2006
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