安絲菌素是一類由珍貴束絲放線菌橙色亞種（Actinosynnema pretiosum ssp.auranticum ATCC31 565）產(chǎn)生的大環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素,具有很強的抗腫瘤活性,在所有安絲菌素衍生物中,安絲菌素P-3（AP-3）的活性最高。目前已上市的治療HER-2陽性晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌的Kadcyla（T-DM1）是由曲妥珠單抗和美登素衍生物DM1偶聯(lián)而成的,而安絲菌素即是一類美登素。當前安絲菌素的產(chǎn)量較低,高純度的安絲菌素極為昂貴,因此,提高AP-3產(chǎn)量已成為當務之急。本研究采用適應性進化和培養(yǎng)條件優(yōu)化的方法初步探索了珍貴橙色束絲放線菌中促進安絲菌素生產(chǎn)的策略。首先,以珍貴橙色束絲放線菌為出發(fā)菌株進行適應性進化。采用適應性進化的策略提高AP-3產(chǎn)量需要合適的脅迫壓力,本研究探索了四種不同的脅迫壓力,即純化的AP-3、利福平、鏈霉素和巴龍霉素,并最終篩選出兩株進化高產(chǎn)菌株Str4和Par 1。這兩株菌發(fā)酵7天AP-3產(chǎn)量分別提高33.4%和31.7%,得率分別提高52.2%和46.4%。其次,對高產(chǎn)進化菌株的相關(guān)基因進行轉(zhuǎn)錄水平分析。選取安絲菌素生物合成基因簇上的一些關(guān)鍵基因... 

【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．５安絲菌素生物合成的ＰＫＳ途徑［１５】??Ｆｉｇｕｒｅ?１．５?ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ＰＫＳ?ｐａｔｈｗａｙ［１５】??

?＾２?ｘＬ－／??圖１．５安絲菌素生物合成的ＰＫＳ途徑［１５】??Ｆｉｇｕｒｅ?１．５?ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ＰＫＳ?ｐａｔｈｗａｙ［１５】??（３）?ＰＫＳ后修飾過程??如圖１．６所示，Ｓｐｉｔｅｌｌｅ等ｔ１６徠用相關(guān)基因的敲除方法探明了整個ＰＫＳ的后修飾過??程、相關(guān)基因的功能及其對應的產(chǎn)物。ＰＫＳ整個后修飾過程不是按順序依次裝配相應基??團，而是呈交叉網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，整個過程中涉及的基因及其功能也多種多樣，如似??編碼甲基轉(zhuǎn)移酶，主要是分別負責１０和１１的甲基轉(zhuǎn)移過程；編碼環(huán)氧酶，主要??負責７的環(huán)氧化過程；編碼鹵化酶，主要負責９的氯代過程；編碼�；D(zhuǎn)??移酶，主要負責６的�；D(zhuǎn)移過程；ｏｓｍ２／編碼氨甲酰轉(zhuǎn)移酶，主要負責４的氨甲酰轉(zhuǎn)??移過程；而編碼糖基轉(zhuǎn)移酶，主要負責將１０轉(zhuǎn)變成平行于ＡＰ－３的另一種產(chǎn)物安??絲菌素糖苷Ｐ－３?（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｏｓｉｄｅ?Ｐ－３），因此圖１．６并未列出。其中ａｓｗ／９編碼的３－氧??－�；D(zhuǎn)移酶作用的底物比較廣泛

圖１．８適應性進化ｌ４９】??Ｆｉｇｕｒｅ?１．８?Ａｄａｐｔｉｖｅ?ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ＾４９］??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3367850